文档介绍：酸乳中乳酸菌的分离鉴定及其活力的测定
指导老师:李作美
班级:2012级食品质量与安全
学生:芦雯
学号:51206041015
目录
概述
1
2
材料与方法
3
结果与分析
4
结论
5
致谢
背景
酸奶是日常生活中的一种传统的受欢迎的发酵型的乳制品,它的营养价值含量相当的丰富,并且对人体有很好的保健功效。
意义
蒙牛冠益乳中的乳酸菌主要为保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌。测定乳酸菌的OD值和产生酸能力来评定酸乳中乳酸菌的活力,对乳酸菌活力的测定,判定酸奶的最佳饮用时间,为酸奶的消费提供科学的依据,同时也对微生物做出研究。
1. 概述
材料:蒙牛冠益乳
A
设备:高压灭菌锅
CO2培养箱
电子天平
冰箱
鼓风干燥箱
超净工作台
光学显微镜
B
2. 材料与方法
材料与设备
酸奶中乳酸菌的
培养分离
酸奶中乳酸菌
菌落数的测定
生化试验鉴定
乳酸菌
产酸能力的测定
生长曲线的绘制
实验方法
把经高温高压灭菌的MRS琼脂培养基冷却到45℃左右,按无菌操作法倒7只平板,倒平板时注意量的把握,浅浅的一层,待凝固。
用一支1mL无菌移液管分别吸取10-2、10-3、10-4、10-5、10-6、10-7和10-8的稀释菌悬液各1mL,分别接种在与之相对应的7个无菌平板中,每个平皿放稍许;马上用无菌玻璃涂棒将样品菌液均匀地涂布在平板,放置一段时间后,将之倒置,最后放入37℃恒温箱中培养48h。
恒温培养48h过后,取出培养平板;观察培养基内菌落的形态,找出乳酸菌菌落。
选取一块干净的载玻片,在载玻片的中央滴加一滴生理盐水,在无菌操作法的环境下,用接种环挑取少量乳酸菌涂片;结晶紫初染→碘液媒染→乙醇脱色→番红复染,干燥后用油镜观察。
生化试验鉴定乳酸菌
糖发酵试验
试验方法:在无菌操作的环境下,用接种环挑取一定的量培养基上的乳酸菌,使之接种在发酵液体的培养基的试管中。在完成接种任务后,将乳酸菌培养基试管放入培养箱中培养。每天定时观察试验结果,观察培养基内颜色有没有发生变化,即有没有产酸。查看小倒管中有没有气泡产生,若出现微小气泡,也可视为产气阳性。我们有的时候还能观察到接种的乳酸菌有没有动力,如果有动力,乳酸菌培养物就能飘散着生长在培养基中。
将麦芽糖、七叶苷、乳糖、蔗糖和葡萄糖五种糖的发酵培养基,分别加入试管中,高度约为整个试管的三分之二。分别用接种环挑取MRS琼脂培养基中的乳酸菌的疑似菌落接种在这几个试管中,放入二氧化碳培养箱中培养2-3d(37℃)。
各种生化指标的鉴定,获得乳酸菌的生化特性。
酸奶中乳酸菌菌落数的测定
(1)配置酸奶溶液
吸取1ml酸奶于一支标有10-1标号的无菌生理盐水中配成1:10的稀释液。
(2)稀释
吸取lmL混合均匀的1:10的酸奶稀释液加入标有10-2标号试管内,同理作10倍递增稀释液。
吸取10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6、10-7、10-8八个梯度的酸奶稀释液,依次放入相应的无菌平皿中,每个平皿放浅浅的一层。
(3) 倒平板.
平皿中加入稀释液后,马上把冷至45℃左右的改良TJA培养基加入平皿中,用1mL无菌生理盐水作空白对照,等待培养基凝固之后,把平板倒置,放入恒温培养箱中培养,温度在37℃左右,培养时间为48h。
(4) 观察计数:
观察乳酸菌菌落的形态特点,把菌落数在30-300之间的平板挑选出来,开始计数。则1mL检样中乳酸菌数为:(N1+N2) X A/2
注:
单位是:cfu/mL
N1、N2-------平行平皿中乳酸菌落个数
A--------稀释倍数
挑选出乳酸菌生长繁殖适宜的三个培养基平板,将培养分离出来的乳酸菌菌株,用接种环挑取一定量的菌种,将它接种在MRS培养基中,将之分别标号为1、2、3,然后将之放入恒温培养箱中,进行摇床培养。每隔2h测量一次乳酸菌的OD值,直至OD值不再明显变化为止。并通过实验所得到的OD值,绘制出乳酸菌的生长曲线,最后观察每个生长期的变化,找出指数期的时间段。
活力的测定是指该菌种产酸能力,把正处在指数生长期的乳酸菌按3%的量接种到60mL的新鲜牛奶中,然后每隔2h测定一次牛奶的酸度变化,直至牛奶酸度变化不再明显。
生长曲线的绘制
产酸能力的测定