文档介绍：血清总蛋白的测定及白球的含量比
双缩脲法和溴甲酚绿法
小组成员:付德华程耀锋万育林黄亚赵维琦
血液·血浆·血清
血液包括血浆和血细胞
血浆是血液的重要组成部分,为淡黄色液体
血清为血液凝固后,在血浆中除去纤维蛋白后得到的淡黄色透明液体
总蛋白测定及白蛋白测定
实验目的:
熟悉血清蛋白的测定方法(双缩脲法)。
掌握血清总蛋白测定的临床意义。
进一步巩固掌握721E型分光光度计的使用。
熟悉血清白蛋白的测定方法(溴甲酚绿法)。
掌握血清白蛋白的测定和白蛋白和球蛋白的含量比(A/G)测定的临床意义。
实验原理
(总蛋白)双缩脲法的原理:双缩脲在碱性环境中,能与硫酸铜结合成紫色的化合物,此反应称为双缩脲反应。
蛋白质分子中含有肽键与缩脲结构相似,故也能进行此反应。反应生成紫红色配合物在540nm处有明显吸收峰,吸光度在一定范围内与蛋白质的含量成正比关系,故双缩脲反应可作为蛋白质测定的依据。 双缩脲反应并非是蛋白质特有的颜色反映! 凡分子内含有2个或2个以上甲酰基氨基(-CONH2-)均可呈双缩脲反映。
凯式定氮法
测定化合物或混合物中总氮量的一种方法,即在催化剂条件下,用浓硫酸将有机氮转化为无机铵盐,然后在碱性条件下将铵盐转化为氨,然后用过量的酸液吸收用标准碱滴定,这样就可以算出样品中的总氮量。由于一般氮元素质量占蛋白质质量的 16% ,故样品中蛋白质含量=含氮量*
实验操作
测定管
标准管
空白管
血清(ml)
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蛋白质标准液(ml)
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生理盐水(ml)
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双缩脲试剂(ml)
取3支试管,按下表操作。
混匀,37℃水浴放置10分钟,以空白管调零点,在540nm波长处进行比色,分别读取各管的吸光度。
计算公式(P65)
实验原理
白蛋白具有与阴离子染料结合的性质,在PH=,带正电荷的白蛋白(PI=)与阴离子染料溴甲酚绿(BCG)结合,由黄色变成蓝绿色。蓝绿色的深浅与白蛋白的浓度成正比,在波长620纳米处有光吸收峰。因此,应用BCG法可以直接测定血清白蛋白的含量。试剂中加入非离子型表面活性剂,可提高蛋白质与染料的结合力和溶解度。