文档介绍：该【细胞传代实验报告 】是由【碎碎念的折木】上传分享，文档一共【38】页，该文档可以免费在线阅读，需要了解更多关于【细胞传代实验报告 】的内容，可以使用淘豆网的站内搜索功能，选择自己适合的文档，以下文字是截取该文章内的部分文字，如需要获得完整电子版，请下载此文档到您的设备，方便您编辑和打印。[标签:标题],为生物技术在医学上的应用打下基础。二、原理从生物体中取出某种组织或细胞,模拟体内生理条件,在人工培养条件下使其生存、生长、繁殖或传代,这一过程称为细胞培养。细胞培养技术的最大优点是使我们得以直接观察活细胞,并在有控制的环境条件下进行实验,避免了体内实验时的许多复杂因素,还可以与体内实验互为补充,可同时提供大量生物性状相同的细胞作为研究对象,耗费少,比较经济,因此成为生物学研究的重要手段。细胞培养可分为原代培养和传代(继代)培养。直接从体内获取的组织细胞进行首次培养为原代培养;当原代培养的细胞增殖达到一定密度后,则需要做再培养,即将培养的细胞分散后,从一个容器以1:2或其他比率转移到另一个或几个容器中扩大培养,为传代培养,传1/25---------------------------------------------感谢观看本文-------谢谢-----------------------------------------------------------[标签:标题]2016代培养的累积次数就是细胞的代数。细胞培养是一种程序复杂、要求条件多而严格的实验性工作。所有离体细胞的生长都受温度、渗透压、pH值、无机盐影响,消毒、配液等均有严格的规范和要求,特别是无菌操作是细胞培养成败的关键。三、材料和试剂1、细胞:293细胞株2、试剂:,胰酶、1640培养基3、仪器和器材:倒置显微镜,培养箱、电动枪,培养板,吸液枪,5ml玻璃吸管、酒精灯等四、操作步骤1、将长满细胞的培养板中原来的培养液吸去。2、加入1~,胰酶溶液,使板底细胞都浸入溶液中。3、马上吸走胰酶液,再次加入2ml左右的胰酶,同样马上吸去,再加入几滴胰酶放入培养箱中消化几分钟4、用吸管将贴壁的细胞反复吹打成悬液,,加入4ml左右的2/25---------------------------------------------感谢观看本文-------谢谢-----------------------------------------------------------[标签:标题],:消化液配制方法:,加入100ml10xPBS+纯水溶解到1L,滤器过滤除菌,4?保存,用前可在37?下回温。10xPBS配方:Na2HPO4()KH2PO4()NaCl(80g)KCl()(调至PH=)五、实验结果传代后的细胞在2小时左右就能附着在培养瓶壁上,2天左右就在瓶内形成单层,达到七八成满。这时需再次传代六、讨论与反思无菌操作中的注意事项在无菌操作中,一定要保持工作区的无菌清洁。为此,在操作前要认真地洗手并用75,乙醇消毒。操作前20,30分钟起动超净台灭菌。培养瓶要在超净台内才能打开瓶塞,打开之前和加塞前瓶口都要在酒精灯上烧一下,打开瓶口后的操作全部都要在超净台内完3/25---------------------------------------------感谢观看本文-------谢谢-----------------------------------------------------------[标签:标题]2016成。操作完毕后,加上瓶塞,才能拿到超净台外。使用的吸管在从消毒的铁筒中取出后要手拿末端,将尖端在火上烧一下,戴上胶皮乳头,然后再去吸取液体。总之,在整个无菌操作过程中都应该在酒精灯的周围进行。每天观察细胞形态,掌握好细胞是否健康的标准:健康细胞的形态饱满,折光性好,生长致密时即可传代。多做,熟能生巧一、【实验目的】1、了解动物细胞传代培养的基本原理。2、掌握动物细胞传代培养的基本操作,并对Hela细胞进行传代培养。二、【实验原理】HeLa是HenriettaLacks的简称,HenriettaLacks是一位患有子宫颈癌的美国妇女的名字,在她死后,该细胞走被广泛散发到各研究机构,并无限次地繁殖分裂下去。培养细胞的特性:贴附生长:必须贴附于支持物表面才能生长。见于各种实体瘤细胞。悬浮生长:于悬浮状态下即可生长,不需要贴附于4/25---------------------------------------------感谢观看本文-------谢谢-----------------------------------------------------------[标签:标题]2016支持物表面。见于各种造血系统肿瘤细胞。每代贴附生长细胞的生长过程:1、游离期细胞接种后在培养液中呈悬浮状态(也称悬浮期。此时细胞质回缩,胞体呈圆球形。10分钟一4小时2、贴壁期细胞附着于底物上,游离期结束。细胞株平均在10分钟一4小时贴壁。3、血清中有促使细胞贴壁的冷析球蛋白和纤粘素、胶原等糖蛋白,这些带正电荷的糖蛋白的促贴壁因子先吸附于底物上,悬浮细胞再与吸附有促贴壁因子的附着。4、潜伏期此时细胞有生长话动,而无细胞分裂。细胞株潜伏期一般为6,24小时。5、对数生长期细胞数随时间变化成倍增长,活力最佳,最适合进行实验研究。、停止期细胞长满瓶壁后,细胞虽有活力但不再分裂细胞传代方法1、悬浮生长细胞传代离心法传代:离心去上清,沉淀物加新培养液后再混匀传代。直接传代法:悬浮细胞沉淀在瓶壁时,将5/25---------------------------------------------感谢观看本文-------谢谢-----------------------------------------------------------[标签:标题]2016上清培养液去除l,2一2,3,用吸管直接吹打形成细胞悬液再传代。,但贴壁不牢,可用直接吹打法使纫胞从瓶壁脱落下来,进行传代。3、贴壁生长细胞传代采用酶消化法传代。,的胰蛋白酶液。细胞培养用液的配制1、D-Hanks原液试剂配方******、D-Hanks工作液试剂配方D-%酚红液4ml3、消化液:胰蛋白酶作用于与赖氨酸或精氨酸相连接的肽健,除去细胞间粘蛋白及糖蛋白,影响细胞骨架,从而使细胞分离。胰蛋白酶液浓度越高,作用越强,但超过一定限度会损伤细胞。胰蛋白酶是一种黄白色粉末,用无Ca2+、Mg2+,。用滤器过滤除菌。胰蛋白酶液消化时间:2-10分钟。用含血清培养液6/25---------------------------------------------感谢观看本文-------谢谢-----------------------------------------------------------[标签:标题]2016终止其对细胞的消化作用完全培养基的组成基础培养基80,一95,血清5,一20,、链霉素各100卑位,毫升血清质量好坏是实验成败的关键。常用血清有胎牛血洁、新生牛血清、小牛血情、兔血清、马血清等,其中以胎牛血清质量最好。