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MS1MS2Q1q2Q3QqQ仪器可以方便的改变离子的动能,因此扫描速度快,体积小,常作为台式进入常规实验室,缺点是质量范围及分辨率有限,不能进行高分辨测定,只能做到单位质量分辨。〔通过高分辨能得到化合物的分子式〕在液质联机中使用的碎片化手段,能量都是以碰撞的形式输送给分子离子,这个能量足以使得处在能量亚稳态分子中的某些化学键断裂并使一些特定的分子发生结构重排。碰撞诱导解离CID质谱:选择一定质量的离子作为母体离子,进入碰撞室,室内充有靶子反响气体(碰撞气体:N2、He、Ar、Xe、CH4等),发生离子—分子碰撞反响,从而产生‘子离子’,再经MS2的分析器及接受器得到子离子质谱,一般称做CID(collision-induceddissociation)谱影响CID质谱的因素:较大影响的因素有:所用碰撞气体的种类,压力,离子的能量,仪器的配置以及离子电荷状态由于在不同的仪器上不可能在完全相同的条件下去分析样品,任何一个给定的化合物将在不同的条件下给出差异或大或小的质谱,尤其是各个离子峰的相对丰度的差异几乎是无法防止的。因而目前尚难以建立商品化的谱库供检索使用,只能进行人工解析或自己建库。大气压电离技术中产生的离子为偶数电子离子,其主要的碎片应由化学键的诱导断裂和重排反响来产生,所以在EI质谱解析中总结出的偶数电子离子的开裂规那么一般可适用于CID质谱的解释。检测接收器:接收离子束流的装置,有:电子倍增器、光电倍增器、微通道板数据及供电系统将接收来的电信号放大、处理并给出分析结果及控制质谱仪个局部工作。从几伏低压到几千伏高压。LC-:ESI适合于中等极性到强极性的化合物分子,特别是那些在溶液中能预先形成离子的化合物和可以获得多个质子的大分子〔如蛋白质〕APCI不适合可带多个电荷的大分子,其优势在于弱极性或中等极性的小分子的分析。、负离子模式的选择: 选择的一般原那么为:正离子模式:适合于碱性样品,可用乙酸或甲酸对样品加以酸化。样品中含有仲氨或叔氨时可优先考虑使用正离子模式。负离子模式:适合于酸性样品,可用氨水或三乙***对样品进行碱化。样品中含有较多的强伏电性基团,如含***、含溴和多个羟基时可尝试使用负离子模式。、乙***、水和它们不同比例的混合物以及一些易挥发盐的缓冲液,如甲酸铵、乙酸铵等,还可以参加易挥发酸碱如甲酸、乙酸和氨水等调节pH值。LC/MS接口防止进入不挥发的缓冲液,防止含磷和***的缓冲液,含钠和钾的成分必须<lmmol/l。〔盐分太高会抑制离子源的信号和堵塞喷雾针及污染仪器〕含甲酸〔或乙酸〕<2%。含三***乙酸≤%。含三乙***<l%。含醋酸铵<10一5mmol/l。送样前一定要摸好LC条件,能够根本别离,缓冲体系符合MS要求。—50ul/min,,目前大多采用l—,TIS源最高允许lml/min,建议使用200—400ul/minAPCI的最正确流速~lml/min,。为了提高分析效率,常采用<100mm的短柱〔此时UV图上并不能获得完全别离,由于质谱定量分析时使用MRM的功能,所以不要求各组分没有完全别离〕。这对于大批量定量分析可以节省大量的时间。,枯燥气影响喷雾去溶剂效果,碰撞气影响二级质谱的产生。操作中温度的选择和优化主要是指接口的枯燥气体而言,一般情况下选择枯燥气温度高于分析物的沸点20℃左右即可。对热不稳定性化合物,要选用更低的温度以防止显著的分解。选用枯燥气温度和流量大小时还要考虑流动相的组成,有机溶剂比例高时可采用适当低的温度和流量小一点的。样品的预处理:为什么要进行样品的预处理:从保护仪器角度出发,防止固体小颗粒堵塞进样管道和喷嘴,防止污染仪器,降低分析背景,排除对分析结果的干扰。要求获得最正确的分析结果,从ESI电离的过程分析:ESI电荷是在液滴的外表,样品与杂质在液滴外表存在竞争,不挥发物〔如磷酸盐等〕防碍带电液滴外表挥发,大量杂质防碍带电样品离子进入气相状态,增加电荷中和的可能。样品的预处理常用方法a〕超滤b〕溶剂萃取/去盐c〕固相萃取d〕灌注〔Perfusion〕净化/去盐e〕色谱别离反相色谱别离亲和技术别离f〕甲醇或乙***沉淀蛋白g〕酸水解,酶解h〕衍生化化合物鉴别全扫描方式〔Q1扫描〕全扫描数据采集可以得到化合物的准分子离子,从而可判断出化合物的分子量,用于鉴别是否有未知物,并确认一些判断不清的化合物,如合成化合物的质量及结构。子离子分析〔MS/MS〕子离子,用于结构判断(得到化合物的二级谱图即碎片离子)和选择离子对作多种反响监测〔MRM〕。子离子谱图与锥体电压断裂谱图〔源内CID〕可能十分相似,所不同的是子离子质谱图只有一种质量通过MS1,因此也所有碎片离子都是由我们所选定的母离子所产生的,所以我们更相信由MS/MS产生的谱图的纯度。用大气压电离质谱仪可以得到分子量信息正离子方式常出现如下离子:-+H-+H-+H-+H-+H2M+H,2M+Na等负离子方式常出现如下离子:--H(113and227background)--H--H--H影响分子量测定的因素1〕pH的影响:正离子方式pH要低些,负离子方式pH要高些,除对离子化有影响外,还影响LC的峰形。2〕气流和温度:当水含量高及流量大时要相应增加。3〕溶剂和缓冲液流量:流速适当高可以提高出峰的灵敏度。4〕溶剂和缓冲液的类型:通常正离子用甲醇好,负离子乙***好些5〕选择适宜的液相色谱类型:正相、反相、选择适宜的色谱柱6〕适宜的电压:DP电压高时,样品在源内分解或碎裂;高DP电压时回使多电荷离子比例低,多聚体也减少7〕样品结构和性质8〕杂质的影响:溶剂的纯度、水的纯洁程度等。当成分复杂,杂质太多时,竞争使被测物离子化不好,同时使LC别离不好9〕样品浓度不够,有时需要浓缩分子量测定中的误判溶剂中的杂质来自于塑料添加剂的峰样品容器不干净,常见外表活性剂的峰进样系统污染样品在源内碎裂,形成碎片离子LC-MS中常见的本底离子