1 / 22
文档名称:

《双向电泳的操作》.ppt

格式:ppt   大小:3,340KB   页数:22页
下载后只包含 1 个 PPT 格式的文档,没有任何的图纸或源代码,查看文件列表

如果您已付费下载过本站文档,您可以点这里二次下载

分享

预览

《双向电泳的操作》.ppt

上传人:相惜 2024/4/16 文件大小:3.26 MB

下载得到文件列表

《双向电泳的操作》.ppt

相关文档

文档介绍

文档介绍:该【《双向电泳的操作》 】是由【相惜】上传分享,文档一共【22】页,该文档可以免费在线阅读,需要了解更多关于【《双向电泳的操作》 】的内容,可以使用淘豆网的站内搜索功能,选择自己适合的文档,以下文字是截取该文章内的部分文字,如需要获得完整电子版,请下载此文档到您的设备,方便您编辑和打印。双向电泳的操作2007-7-4精选课件步骤样品制备〔Samplepreparation〕固相pH梯度胶条的水化〔IPGstriprehydration〕第一向等电聚焦〔IEF〕第一向胶条的平衡〔IPGstripequilibration〕第二向SDS电泳〔SDS-PAGE〕检测染色〔Detection/Staining〕蛋白点的挖取,收集质谱分析精选课件总的策略精选课件参考资料://proteomics://dxy/bbs蛋白质组学导论-----生物学的新工具(2005)(2004)夏其昌编著精选课件精选课件一般性原那么尽可能的提高样品蛋白的溶解度,抽提最大量的总蛋白,减少蛋白质的损失减少对蛋白质的人为修饰破坏蛋白质与其他生物大分子的相互作用,并使蛋白质处于完全变性状态精选课件样品制备需要的试剂离液剂(chaotropes):尿素〔Urea〕和硫脲〔thiourea〕外表活性剂〔sufactants〕也称去垢剂:NP-40、TritonX-100等非离子去垢剂CHAPS与Zwittergent系列等双性离子去垢剂复原剂〔reducingagents〕二硫苏糖醇〔DTT〕二硫赤藓糖醇〔DTE〕磷酸三丁酯〔TBP〕选择性的参加Tris-base蛋白酶抑制剂〔如EDTA、Pefablocproteaseinhibitor、PMSForProteaseinhibitorcocktails〕核酸酶精选课件影响蛋白质可溶性和2DE重复性的物质核酸超声或核酸酶处理脂多糖超速离心除去盐类小分子透析可以降低盐浓度,但时间太长采取凝胶过滤或沉淀/重悬法脱盐,但会造成蛋白质的局部损失。精选课件常用裂解液UreaThioureaCHAPSDTTPharmalytepH3-10Tris-BasePefablocproteaseinhibitor1%SDS精选课件样品制备程序培养细胞〔culturecell〕样品处理方法〔1〕培养细胞的收集;〔2〕用磷酸缓冲液〔PBS〕洗细胞3次〔室温,1000g,各2min〕;〔3〕,吸干残留的PBS;〔4〕参加裂解缓冲液〔〕,在室温振荡1h,使其充分溶解;〔5〕4℃,40,000g,离心1h;〔6〕吸取上清并用Brandford法定量蛋白,然后分装至Eppendof管里保存在-78℃备用。精选课件