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一种卤代修饰胞苷素的制备方法.docx

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一种卤代修饰胞苷素的制备方法.docx

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文档介绍:该【一种卤代修饰胞苷素的制备方法 】是由【开心果】上传分享,文档一共【9】页,该文档可以免费在线阅读,需要了解更多关于【一种卤代修饰胞苷素的制备方法 】的内容,可以使用淘豆网的站内搜索功能,选择自己适合的文档,以下文字是截取该文章内的部分文字,如需要获得完整电子版,请下载此文档到您的设备,方便您编辑和打印。一种卤代修饰胞苷素的制备方法一种卤代修饰胞苷素的制备方法一种卤代修饰胞苷素,为侧链-C4H8ClO9的氮取代胞苷素,其制备方法包括:以不吸水链霉菌为出发菌,在培养基中发酵培养,分离和纯化后再经化学修饰得到。该修饰胞苷素具有更高的生物抗性和结构稳定性,该制备工艺化学选择性好,工艺条件温和,生产过程环境友好。【专利说明】一种卤代修饰胞苷素的制备方法【技术领域】:[0001]本发明属于微生物农药【技术领域】,涉及一种卤代修饰胞苷素的制备方法。【背景技术】:[0002]农用抗生素(agriculturalantibiotics),简称农抗,是指由微生物发酵产生、具有农药功能、用于农业上防治病虫草鼠等有害生物的次生代谢产物。与一般化学合成农药相比,农用抗生素具有以下特点:①结构复杂活性高、用量小、选择性好;③易被生物或自然因素所分解,不在环境中积累或残留;④生产原料为淀粉、糖类等农产品,属于再生性能源采用发酵工程生产,同一套设备只要改变菌种即可生产不同的抗生素,生产菌大多是土壤中的放线菌,也有真菌和细菌。[0003]核苷类抗生素为一类重要的抗生素,它们是一大类对核苷和核苷酸结构修饰的化合物,以核苷为其共同的母核,有抗细菌、抗真菌、抗锥虫、抗肿瘤、锄草、杀虫、增强免疫力等较广范围的生物活性。不同的核苷类抗生素的差异在于母核以外的侧链基团。农业上应用的核苷类抗生素主要有杀稻痕菌素S(BlasticidinS)和多氧霉素(Polyoxins)。修饰胞苷素为侧链为-C4H8ClO9的氮取代胞苷素。[0004]迄今为止,已经从各种生物(包括细菌、真菌、各类植物)中分离出3800多种卤化物,约95%的卤化物为***化和溴化物,***化和碘化物很少,少数化合物既含***也含碘。许多卤化物,如***霉素(chloramphenicol)、7_***四环素(7-chlotetracycline)、万古霉素(ycin)等都是重要的抗生素。虽然卤素原子的类型、数量以及位置对化合物生物活性的影响没有特定的规律,但是某些卤化物与相应的非卤化物相比,卤化可以增强其生物活性。如,2-***硝吡咯菌素的抗真菌活性只有硝吡咯菌素(含有两个***原子)的10%;与其含***衍生物相比,不含***的蝴蝶霉素没有抗菌活性。【发明内容】:[0005]本发明的目的是提供一种卤代修饰胞苷素的制备方法。[0006]本发明通过下述方法实现的:一种卤代修饰胞苷素的制备方法,1、一种卤代修饰胞苷素的制备方法,[0007](I)以不吸水链霉菌为出发菌,在培养基中发酵培养,[0008](2)分离、纯化发酵液,[0009](3)发酵产物经分离纯化后通过FeCl3配位催化卤代反应进行化学修饰得到侧链为-C4H8ClO9的氮取代胞苷素;[0010]菌株:以吸水链霉菌海南变种SlOl菌株经自然分离后获得的S510菌株为出发菌株。[0011]培养基:玉米粉15~25g、豆饼粉20~35g、葡萄糖15~25g、淀粉8~12g、***化铵I~5g、碳酸钙I~5g,~,~,***~,~,加自来水至1000mL。经121°C高压湿热灭菌20min。[0012]发酵培养:摇床震荡培养,转速为150~250转/分钟,发酵温度:25~35°C,~,通气量1:~I,发酵时间50~100h。[0013]发酵产物分离和纯化:发酵液萃取,用SephadexG_25柱层析,水洗脱,洗脱液经HPLC检测后(C0SM0SILC18Econopak柱,***醋酸水溶液,,紫外检测波长220nm),~85%和60~75%的部分分别合并,再经真空冷冻干燥后即可得到初次分离物。含量在60~75%的初提物再经一次常压柱层析,即可将纯度提高到80~85%,合并两次所得的含量在75%以上的样品,用HPLC半制备柱进彳丁制备,%的精品。将精品溶液冷干后,所得微黄色粉末即为侧链-C4H9O9的氮取代胞苷素。效价测定:管碟法。[0014]化学修饰:发酵产物分离纯化后和KCl反应,以正丁醇为溶剂,FeCl3为催化剂,通过配位催化卤代反应来制备带侧链-C4H8ClO9的氮取代胞苷素。效价测定:管碟法。[0015]本发明的修饰胞苷素具有更高的生物抗性和结构稳定性,该制备工艺化学选择性好,工艺条件温和,生产过程环境友好。所得侧链-C4H9O9的氮取代胞苷素效价为2800μg/L,侧链-C4H8ClO9的氮取代胞苷素效价为6418μg/L。基于上述优点,本发明的带侧链-C4H8ClO9的氮取代胞苷素将在生物农药领域中发挥重要的作用,应用前景广阔。【具体实施方式】[0016]下面结合具体的实施例,对本发明作进一步的阐述,但不限于这些具体的实施例,而所有的实施例均按上述的操作步骤操作。[0017]实施例1[0018]菌株:以吸水链霉菌海南变种SlOl菌株经自然分离后获得的S510菌株为出发菌株。[0019]培养基:玉米粉20g、豆饼粉25g、葡萄糖18g、淀粉10g、***化铵3g、碳酸钙3g,,,***,,加自来水至1000mL。经121°C高压湿热灭菌20min。[0020]发酵培养:摇床震荡培养,转速为220转/分钟,发酵温度:28°C,,通气量1:,发酵时间72h。[0021]发酵产物分离和纯化:发酵液萃取,用S^hadexG_25柱层析,水洗脱,洗脱液经HPLC检测后(C0SM0SILC18Econopak柱,%三***醋酸水溶液,,紫外检测波长220nm),~85%和60~75%的部分分别合并,再经真空冷冻干燥后即可得到初次分离物。含量在60~75%的初提物再经一次常压柱层析,即可将纯度提高到80-85%,合并两次所得的含量在75%以上的样品,用HPLC半制备柱进行制备,%的精品。将精品溶液冷干后,所得微黄色粉末即为侧链-C4H9O9的氮取代胞苷素。效价测定:管碟法。[0022]化学修饰:发酵产物分离纯化后和KCl反应,以正丁醇为溶剂,FeCl3为催化剂,通过配位催化卤代反应来制备带侧链-C4H8ClO9的氮取代胞苷素。效价测定:管碟法。反应条件为:侧链-C4H9O9的氮取代胞苷素:KCl:FeCl3(摩尔比)=20:40:3,溶剂正丁醇的用量为每摩尔侧链-C4H9O9的氮取代胞苷素40ml,反应温度为120°C,收率为91%。[0023]实施例2[0024]菌株:以吸水链霉菌海南变种SlOl菌株经自然分离后获得的S510菌株为出发菌株。[0025]发酵培养基:玉米粉25g、豆饼粉35g、葡萄糖15g、淀粉12g、***化铵5g、碳酸钙5g,,,***,,加自来水至1000mL。经121°C高压湿热灭菌20min。[0026]发酵培养:摇床震荡培养,转速为250转/分钟,发酵温度:25°C,,通气量1:,发酵时间64h。[0027]发酵产物分离和纯化:发酵液萃取,用S^hadexG_25柱层析,水洗脱,洗脱液经HPLC检测后(C0SM0SILC18Econopak柱,***醋酸水溶液,,紫外检测波长220nm),~85%和60~75%的部分分别合并,再经真空冷冻干燥后即可得到初次分离物。含量在60~75%的初提物再经一次常压柱层析,即可将纯度提高到80-85%,合并两次所得的含量在75%以上的样品,用HPLC半制备柱进行制备,%的精品。将精品溶液冷干后,所得微黄色粉末即为侧链-C4H9O9的氮取代胞苷素。效价测定:管碟法。侧链-C4H9O9的氮取代胞苷素效价2567μg/L。[0028]化学修饰:发酵产物分离纯化后和KCl反应,以正丁醇为溶剂,FeCl3为催化剂,通过配位催化卤代反应来制备带侧链-C4H8ClO9的氮取代胞苷素。效价测定:管碟法。反应条件为:侧链-C4H9O9的氮取代胞苷素:KCl:FeCl3(摩尔比)=20:40:3,溶剂正丁醇的用量为每摩尔侧链-C4H9O9的氮取代胞苷素40ml,反应温度为105°C,%。[0029]实施例3[0030]菌株:以吸水链霉菌海南变种SlOl菌株经自然分离后获得的S510菌株为出发菌株。[0031]发酵培养基:玉米粉15g、豆饼粉35g、葡萄糖15g、淀粉Sg、***化铵lg、碳酸钙lg,,,***,,加自来水至1000mL。经121°C高压湿热灭菌20min。[0032]发酵培养:摇床震荡培养,转速为250转/分钟,发酵温度:35°C,,通气量1:,发酵时间84h。[0033]发酵产物分离和纯化:发酵液萃取,用S印hadexG_25柱层析,水洗脱,洗脱液经HPLC检测后(C0SM0SILC18Econopak柱,***醋酸水溶液,,紫外检测波长220nm),~85%和60~75%的部分分别合并,再经真空冷冻干燥后即可得到初次分离物。含量在60~75%的初提物再经一次常压柱层析,即可将纯度提高到80-85%,合并两次所得的含量在75%以上的样品,用HPLC半制备柱进行制备,%的精品。将精品溶液冷干后,所得微黄色粉末即为侧链-C4H9O9的氮取代胞苷素。效价测定:管碟法。[0034]化学修饰:发酵产物分离纯化后和KCl反应,以正丁醇为溶剂,FeCl3为催化剂,通过配位催化卤代反应来制备带侧链-C4H8ClO9的氮取代胞苷素。效价测定:管碟法。反应条件为:侧链-C4H9O9的氮取代胞苷素:KCl:FeCl3(摩尔比)=20:40:3,溶剂正丁醇的用量为每摩尔侧链-C4H9O9的氮取代胞苷素40ml,反应温度为105°C,%。【权利要求】,其制备方法包括:(1)以不吸水链霉菌为出发菌,在培养基中发酵培养,(2)分离、纯化发酵液,(3)发酵产物经分离纯化后通过FeCl3配位催化卤代反应进行化学修饰得到侧链为-C4H8ClO9的氮取代胞苷素;所述的菌株:以吸水链霉菌海南变种SlOl菌株经自然分离后获得的S510菌株为出发菌株;所述的培养基为:玉米粉15~25g、豆饼粉20~35g、葡萄糖15~25g、淀粉8~12g、***化铵I~5g、碳酸钙I~5g,~,~,***~.,~,加自来水至1000mL;所述的发酵培养的条件为:摇床震荡培养发酵,发酵温度:25~35°C,~.,通气量1:~I,发酵时间50~IOOh;所述的发酵产物分离和纯化为:发酵液萃取,用SephadexG_25柱层析,水洗脱,洗脱液经HPLC检测后(C0SM0SILC18Econopak柱,***醋酸水溶液,,紫外检测波长220nm),~85%和60~75%的部分分别合并,再经真空冷冻干燥后即可得到初次分离物。含量在60~75%的初提物再经一次常压柱层析,即可将纯度提高到80~85%,合并两次所得的含量在75%以上的样品,用HPLC半制备柱进行制备,%的精品。将精品溶液冷干后,所得微黄色粉末即为侧链-C4H9O9的氮取代胞苷素;效价测定:管碟法;所述的化学修饰是以KCl为原料,以正丁醇为溶剂。