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】的内容，可以使用淘豆网的站内搜索功能，选择自己适合的文档，以下文字是截取该文章内的部分文字，如需要获得完整电子版，请下载此文档到您的设备，方便您编辑和打印。阿尔茨海默病治疗药物的制作方法专利名称:阿尔茨海默病治疗药物的制作方法技术领域:本发明涉及阿尔茨海默病的治疗。具体涉及利用抗炎症细胞因子或携带抗炎症细胞因子基因的负链RNA病毒载体等表达抗炎症细胞因子的载体,治疗阿尔茨海默病。背景技术:随着日本快速步入老龄化社会,老年性痴呆症及其护理问题日渐成为巨大的社会问题。据报告显示,10%的65岁以上老人患有老年性痴呆症。阿尔茨海默病是导致老年性痴呆症的两大原因之一,约占老年性痴呆症患者的50%,看护问题也已经成为重大的社会问题。目前,阿尔茨海默病的治疗药物有乙酰胆碱类活性剂和乙酰胆碱酯酶抑制剂等乙酰胆碱调控剂、抑制淀粉样蛋白肽生成的P分泌酶(BACE)阻断剂和淀粉样蛋白肽的凝集阻断剂等(3-淀粉样蛋白调控剂、神经肽及神经成长因子等神经保护和神经营养药,此外还有螯合剂、抗氧化剂、抗炎药物等。阿尔茨海默病治疗药物从治疗效果上可划分为以下3种。在阿尔茨海默病的初期使用可在某种程度上改善认知功能,但几乎不能控制痴呆本身的发展,此为第一代药物;既能改善认知功能又可望能够控制病情发展,此为第二代药物;从根本上进行预防、治疗的为第三代药物。目前得到评价的几乎只有第一代药物。关于阿尔茨海默病的发病及进展机制,一种较有力的"淀粉样蛋白级联反应假说"认为,P-淀粉样蛋白肽的生成和储积是形成老年斑的主要原因,期待以P淀粉样蛋白肽为目标的部分药剂有助于第二代或第三代药物有关联的药物的开发。目前的现状是,确实有效的第一代药效自不必说,人们强烈期望出现能够彻底治愈阿尔茨海默病的第二、第三代药物。另一方面,作为被一向认可的发病机制,"炎症假说"认为,阿尔茨海默病的发病是由于阿尔茨海默病患者脑内的炎症性小胶质细胞的活性亢进导致神经细胞死亡。实际已获确认的是,阿尔茨海默病患者脑内的小胶质细胞活性亢进尤其聚积在老年斑周围,且淋巴细胞侵润脑内,进而被炎症激活的物质(如补体)储积脑内。流行病学的调查分析结果表明,抗炎剂尤其是非类固醇抗炎药(NonsteroidalAnti-InflammatoryDrugs:NSAIDs)有望控制阿尔茨海默病的发展,也有报告显示P引咮美辛(indomethacin)在试验性临床试验中明显控制了阿尔茨海默病情的进展(RogersJetal.,;43(8):1609國11.),并以较少影响消化功能的Cox-2特异性抑制剂为主开展了大规模的临床试验。遗憾的是,在以轻到中度的阿尔茨海默病患者为对象进行的l年试验中,没有得到第一代NSAIDs和新一代NSAIDs对阿尔茨海默病情的发展具有控制效果的报告(AisenPSetal.,;289(21):2819-26.,;13(ll):1469-81.,TownsendKPetal";19(12):1592-601.)。报告还显示,作为神经胶质细胞中的诱发炎症的细胞因子产生的选择性抑制剂,被称为MW01-5-188WH的化合物口服给药小鼠后,可控制淀粉样蛋白卩l-42诱导下的海马中白细胞介素1p、胂瘤坏死因子a、S100B的上调,此外,海马神经键不全同时得到恢复,海马依存性Y迷宫行为也得到改善(RalayRanaivoHetal.,;26(2):662-70.)。非专利文献1RogersJetal.,;43(8):1609-11非专利文献2AisenPSetal.,;289(21):2819-26非专利文献3ImbimboBP,;13(ll):1469-81非专利文献4TownsendKPetal.,;19(12):1592-601非专利文献5RalayRanaivoHetal";26(2):662-70发明内容发明所要解决的课题鉴于以上情况,本发明所要解决的课题为提供一种以治疗阿尔茨海默病为目的的新型治疗方法和治疗药物。解决课题的方法本发明者们为完成这一课题不懈努力,发明了有效治疗阿尔茨海默病的全新方法。#元炎症细月包因子(anti-inflammatorycytokines)之一的白细月包介素10(interleukin-10:IL-10)与炎症细胞因子(pro-inflammatorycytokines)活性的竟争性作用可调节炎症反应。有报告指出,阿尔茨海默病中IL-10启动子区域的基因多态(polymorphism)与病情的发展有关(LioDetal.,;4(3):234画8.;ScassellatiCetal";356(2):119-22.;ArosioBetal.,;25(8):1009-15.;MaSLetal";26(7):1005-10.)。但没有以阿尔茨海默病的治疗为目的对抗炎症细胞因子进行评价的实例。本发明使用抗炎症细胞因子和表达抗炎症细胞因子基因的负链RNA病毒载体等载体,提供阿尔茨海默病的新型疗法。本发明还提供一种以治疗和预防阿尔茨海默病为目的的新型基因治疗方法。即本发明涉及一种用于阿尔茨海默病治疗或治疗药物开发的携带抗炎症细胞因子基因的负链RNA病毒载体、包含该负链RNA病毒载体在内的阿尔茨海默病药物组合物及使用该负链RNA病毒载体的阿尔茨海默病治疗和预防方法等,具体为,〔1〕一种阿尔茨海默病预防或治疗用药物组合物,其包含抗炎症细胞因子或其部分肽、或者携带编码该细胞因子或其部分肽的负链RNA病毒载体;〔2〕〔1〕所述的组合物,其包含携带编码抗炎症细胞因子或其部分肽基因的负链RNA病毒载体;〔3〕〔1〕所述的组合物,其包含抗炎症细胞因子或其部分肽;〔4〕〔1〕或〔2〕所述组合物,其中,负链RNA病毒载体为副粘病毒载体;〔5〕〔1〕或〔2〕所述组合物,其中,负链RNA病毒载体为仙台病毒载体;〔6〕〔1〕-〔5〕中任一项所述的组合物,其中,抗炎症细胞因子从白细胞介素4、白细胞介素10、白细胞介素13及其部分肽组成的群体中选择;〔7〕〔1〕-〔6〕中任一项所述的组合物,其用于经鼻给药;〔8〕一种用于阿尔茨海默病治疗或药物开发的携带抗炎症细胞因子或其部分肽的基因的负链RNA病毒载体;〔9〕一种用于阿尔茨海默病治疗或药物开发的抗炎症细胞因子蛋白质;〔10〕〔8〕所述载体,其中,负链RNA病毒载体为副粘病毒载体;〔11〕〔8〕所述载体,其中,负链RNA病毒载体为仙台病毒载体;〔12〕〔8〕、〔10〕或〔11〕所述载体,其中,抗炎症细胞因子是从由白细胞介素4、白细胞介素10、白细胞介素13及它们的部分肽组成的群体中选择的;〔13〕一种包含抗炎症细胞因子或其部分肽、或者携带编码该细胞因子或其部分肽的基因的负链RNA病毒载体的给药步骤的阿尔茨海默病治疗或预防方法;〔14〕〔13〕所述方法,所述给药为经鼻给药;本发明还包含,〔1〕一种用于阿尔茨海默病治疗或药物开发的携带抗炎症细胞因子或其部分肽的基因的负链RNA病毒载体;〔2〕〔1〕所述载体,其中,负链RNA病毒载体为副粘病毒载体;〔3〕〔1〕所述载体,其中,负链RNA病毒载体为仙台病毒载体;〔4〕〔1〕-〔3〕任一项所述载体,其中,抗炎症细胞因子是从白细胞介素4、白细胞介素l0、白细胞介素l3及其部分肽组成的群体中选择的。〔5〕一种包含〔1〕-〔4〕中的任一载体的阿尔茨海默病治疗或预防药物组合物。〔6〕〔5〕所述的药物组合物,其用于经鼻给药。本发明还涉及一种包含抗炎症细胞因子或对其进行编码的载体的给药步骤的治疗或预防阿尔茨海默病的方法。本发明尤其涉及一种包含携带抗炎症细胞因子基因的负链RNA病毒载体等可以表达抗炎症细胞因子的载体的给药步骤的治疗或预防阿尔茨海默病的方法。该负链RNA病毒载体优选副粘病毒载体,更优选仙台病毒载体。同时抗炎症细胞因子优选IL-IO。给药方式优选经鼻给药。此外,本发明还涉及在生产治疗或预防阿尔茨海默病药物中,抗炎症细胞因子或对其进行编码的载体的应用。本发明尤其提供在生产治疗或预防阿尔茨海默病药物中,抗炎症细胞因子、携带该抗炎症细胞因子基因的载体、特别是携带抗炎症细胞因子基因的负链RNA病毒载体的应用。该负链RNA病毒载体优选副粘病毒载体,更优选仙台病毒载体。抗炎症细胞因子优选IL-IO。含有负链RNA病毒载体的药物优选制成适合经鼻给药的剂型。发明的效果本发明提供一种利用抗炎症细胞因子的阿尔茨海默病新型治疗药物和的阿尔茨海默病治疗药和利用该载体对阿尔茨海默病进行基因治疗的方法。本发明的方法可以成为一种可替代其他阿尔茨海默病治疗方法或者与其并用的新型治疗方法。图1IL-10表达SeV载体给药后的血中IL-10量的测定图。对照组使用了LacZ表达SeV载体。血中IL-10以IL-10表达SeV载体特异性及剂量依赖性的方式被检出。图2大脑新皮质头顶叶及海马的老年斑图(抗A(3抗体染色)。载体给药4周后(上图面)和8周后(下图面),SeV18+mlL10/TSAF群(右)大脑新皮质的老年斑(红褐色斑状物)明显少于SeV18+LacZ/TSAF群(左)。图3老年斑占大脑新皮质的面积率(%)示意图(平均士SE)。通过图像解析软件测出给药8周后大脑新皮质中老年斑的面积率(%),SeV18+mlL10/TSAF群明显(p图4嗅球中的小胶质细胞活性化(Iba-1染色)示意图。给药4周后(上图面)和8周后(下图面),SeV18+mlL10/TSAF群(右)嗅球的活性化小胶质细胞(红褐色的变形细胞)明显多于SeV18+LacZ/TSAF群(左)。图5Iba-l染色嗅球切片的一个分区中的小胶质细胞面积的比率(%)图(平均士SE)。通过图像解析软件测出的给药8周后嗅球的一个分区中Iba-l阳7性小胶质细胞面积率(%),SeV18+mlL10/TSAF群明显(p图6IL-10表达SeV载体给药后脑组织中的A卩量的测定图。对照使用了LacZ表达SeV载体。IL-10表达SeV载体给药群几乎所有级分均可见A卩量减少,尤其可溶性A(340(TBS级分、1%Triton级分)和不溶性Ap42(蚁酸级分)明显减少。图7IL-10表达SeV载体给药后正常小鼠血中IL-10量的测定图。血中IL-10以剂量依赖性的方式被检出。图8IL-10表达SeV载体给药后的血中IL-10量动力学图。SeV18+mlL10/TSAF—次经鼻给药(5xl07CIU/只)得到的值为AUC=176,000pgh/ml。图9IL-10表达SeV载体给药后的血中IL-10的脑内转移示意图。对正常C57BL/6N小鼠(N=5)以5xl08CIU/只/53(!1经鼻给药SeV18+mlL10/TSAF或SeV18+LacZ/TSAF。对照组同量给药DPBS(-)。给药第3天回收脑(分为嗅球、大脑/海马、小脑/延髓3部分)、鼻粘膜、气管/肺、血浆,使用ELISA对各组织中的mIL-lO进行了定量。(B)为(A)嗅球、大脑/海马及小脑/延髓中mlL-10表达量的纵坐标放大图。图10IL-10表达SeV载体经鼻给药后的IL-10脑内转移示意图。对正常C57BL/6N小鼠(N=5)以5xl08ClU/只/53fi1经鼻给药SeV18+mlL10/TSAF或SeV18+LacZ/TSAF。对照组同量给药DPBS(-)。给药第3天回收了灌流脑。使用ELISA对脑(分为嗅球、大脑/海马、小脑/延髓3个部分)、鼻粘膜、气管/肺及血浆中的mlL-10进行了定量。(B)为(A)嗅球、大脑/海马及小脑/延髓中mlL-10表达量的纵坐标放大图。图11IL-10表达SeV载体经鼻给药后的IL-10脑内转移示意图。对正常C57BL/6N小鼠(N=5)以5xl08ClU/只/53ial经鼻给药SeV18+mlL10/TSAF或SeV18+LacZ/TSAF。对照组同量给药DPBS(-)。给药第7天回收脑(分为嗅球、大脑/海马、小脑/延髓为3等分)、鼻粘膜、气管/肺、回收血浆,使用ELISA对各组织中的mIL-lO进行了定量。(B)为(A)嗅球、大脑/海马及小脑/延髓中mlL-10表达量的纵坐标放大图。图12IL-10表达SeV载体经鼻给药后IL-10脑内转移示意图。对正常C57BL/6N小鼠(N=5)以5xl08CIU/只/53nl经鼻给药SeV18+mlL10/TSAF或SeV18+LacZ/TSAF。对照组同量给药DPBS(-)。给药第7天回后回收灌流脑。使用ELISA对脑(分为嗅球、大脑/海马、小脑/延髓3个部分)、鼻粘膜、气管/肺及血浆中的mlL-10进行了定量。(B)为(A)嗅球、大脑/海马及小脑/延髓中mlL-10表达量的纵坐标放大图。图13IL-10表达SeV载体经鼻给药后的IL-10脑内转移(CSF内浓度)示意图。对正常Wistar大鼠(N=5)以lx109CIU/只/106pl经鼻给药SeV18+mlL10/TSAF(大鼠#1-#5)或