文档介绍：五、植物细胞骨架的光学显微观察
一、实验目的
通过光学显微镜观察细胞骨架的结构,并掌握显示植物细胞骨架的方法及原理。
二、实验原理
细胞骨架是指真核细胞中与保持细胞形态结构和细胞运动有关的纤维网络。包括微管、微丝和中间丝。
Triton X-100:是一种非离子型表面活性剂(或称去污剂),1%的Triton X-100常用于漂洗组织标本。
在细胞骨架的观察实验中,采用去垢剂TritonX-100 的缓冲液处理植物材料时,可将细胞的膜结构和大部分蛋白质抽提掉,但细胞骨架系统的蛋白却被保存下来,后者用考马斯亮蓝R250 染色,在光学显微镜下可见一种网状结构。
三、实验用品
(一)器材:显微镜、50ml烧杯、滴管、容量瓶、载玻片、盖玻片、镊子。
(二)试剂:
:50mmol/L咪唑,50mmol/L KCl, mmol/L MgCl2,lmmol/L EGTA(乙二醇双(a-氨基乙酸)醚四乙酸), EDTA,lmmol/L巯基乙醇或DTT(二硫苏糖醇)。
。
%Triton X-100,用M-缓冲液配。
%考马斯亮蓝R250,,冰乙酸7ml,。
%戊二醛,用6mmol/L磷酸缓冲液()配制。
%、7%、95%乙醇。
、正丁醇、二甲苯、树胶。
(三)材料:洋葱鳞茎。
四、实验方法
(一)取洋葱鳞茎内表皮细胞(约lcm2大小),使其下沉。
(二)吸去磷酸缓冲液,用1%Triton X-100处理20-30分钟。
(三)吸去Triton X-100,用M-缓冲液洗3次,,每次10分钟。
(四)3%-1小时(对照组开始处理)。
(五),每次10分钟。
(六)%考马斯亮蓝R250染色20-30分钟。
(七)用蒸馏水洗1-2次,材料置于载玻片上,加盖玻片,即可镜检。
(八)如作永久制片,可使样品顺序通过如下试剂:50%乙醇,70%乙醇,95%乙醇,