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】的内容，可以使用淘豆网的站内搜索功能，选择自己适合的文档，以下文字是截取该文章内的部分文字，如需要获得完整电子版，请下载此文档到您的设备，方便您编辑和打印。:..mec分型的意义//-tec分型的意义欧阳范献鲍时翔耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(.,MRSA)1961年首次在英国报导,因其耐药谱广,耐药性高,传播速度快而成为全世界关注的焦点,其鉴定,分型,基因结构,致病机理,,为我国相关研究提供一些借鉴资料,现将MRSA全基因研究现状以及葡萄球菌染色体m盒(alc舾sechl'otllos(xq2e,SCCmec)的结构,,MRsA的全基因结构目前已有7株葡萄球菌的全基因进行了测序分析(COL,MRSA252,MSSA476,MW2,Mu50,N3】5,NCIV~325),,:三者的染色体为环形DNA,—,含有2595—2714个开放式阅读框(openreadingframes,ORF).三者的核苷酸具有高度同源性:%.%,MW2与Mu为舛种系发生学研究和核酸序列对比分析显示:葡萄球菌和梭状芽孢杆菌的基因非常相似,其染色体均含有典型的,特异性:..看家基因——即与营养代谢,生长繁殖相关的基因;金黄色葡萄球菌N315编码的蛋白有52%与枯草芽孢杆菌(Bbacillu*n硼)和嗜碱耐热芽孢杆菌(Ba—cillushal~ttralla)编码的蛋白相同…,据此推测它们来自同一祖先——,除来自祖先菌的部分基因簇外,余下基因编码的蛋白与其他菌株,如链球菌,嗜热性古细菌,真细菌(TherrnophitkArchaeafebacteria),弧菌,埃希菌,甚至真核细胞,蓝藻(作者单位:570311中国热带农业科学院热带怍蜘生物技术研究所,热带作物生物技术国家重点实验室海南省农垦总局医院医院感染监控科通讯作者::***@,电话:0日98-668t~$~),因而称为基因岛(,GI).在金黄色葡萄球菌中,含有8个Gl(见图1),其命名依据是在染色体上的整合位置和表达物功能,;.圈1MW2的功能性基因结构图殛其与N315,MI渤比较从外向内依次为金黄色葡萄球菌菌株t,:..,最内环示棱苷酸的位置(^m).靠近启始的插^于IS431脚c,转位子T~^,To5801.'lX554b!.;uSna,口基因岛是编码***的基因簇居地,~rSo2(*)和usal(**1帕整舍位置;usa3是MW2,MuSO上的致睛基因岛,u舢是N3I5和Mr,50上的致病基因岛;】,髓∞是MuS0,N315,:包括:①uSaa,u0基因岛家族(G1family),是编码***:白细胞***(idine,tuk)D,E基因和葡萄球菌内***(Staphy/usenterotoxin,se)和外***(Staphyk,,set)基因,它们在所有菌株中均存在,特点是:基因数量在不同菌株间存在较大差异含有一不完整的转移酶基因和一限制性修饰酶系统基因,前者决定其不能从染色体上自发剔除,后者由宿主一箱雎j'r..O瑚6年12月第26卷第12QfinJMicmbiolbmm0l,December2006,Vol26,(hostalspecificitydeten~nant,hsd)S和M组成.②uSal~4基因岛,它们在某些菌株中可缺失或存在等位基因,且携带有完整的重组酶,大多都可以从整合位点剔除【2】.如:uSal和usa2只在MW2中存在,携带有整合酶基因(,-~gene,)vSa1和usa2(/m-usa1,/nt--usa2);MW2的usa3为Ⅱ型,带有内***基因se/2和sec4,与MuSO携带的:..I型usa3的整合位置完全相同;N315和MuS0的uSa4(uSa4n/uSa4mu)均带有葡萄球菌内***基因(2,黝4)和(toxic-shock-syndrometoxin)基因,.,嬲::它位于金黄色葡萄球菌染色体复制起始点附近(图1),整合部位是在嘌呤碱合成酶基因(purA)和葡萄球菌表面蛋白A()基因之间,位于purA下游约10l【b,上游66~89kb;因多数耐药基因均位于此处,故称为金黄色葡萄球菌的耐药岛(resistanceisland,m).:金黄色葡萄球菌染色体上除拥有上述GI外还携有多个转座子(transposon,Tn),插入子(insertionsequence,IS)和噬菌体拷贝,它们也是可移动的GI的组成成分,常常携带有某些抗性和***基因,在金黄色葡萄球菌的生存和致病性中起着重要作用….'nI554携带有壮观霉素(spectinomycln,sp)(~lide-ide-***,MLS),整合有8个(~8),,ISll81-m2,与Tn554不同,,(蜊315,蚋l50A)携带有2个内***基因seg2和2(础,印,础,sea),MW2特有的嗜菌体(~II211][W,携带有P-V杀白细胞***(-Valentineleukocidin)F和S基因(.F-PV,矗胳PV),其编码的杀白细菌***与多型溶血性肺炎有关引.:..二,m即的结构,分型及其作用SCCmec大小从21~67l【b不等,可以整个地从染色体中自发剔除,也可从一个菌细胞转移整合到另一个菌细胞染色体中,是一个可移动的复合体结构SCCmec型合部位固定于染色体复制起始点附近,一个功能暂未阐明的开放式阅读框架x(o,fX)处,,在细胞分裂时可在子细胞内获得2个甚至4个基因拷贝【6】.整合点除有位置特异性外还有方向性,其方向是由染色体盒重组酶基因(咄娉e№binase,.cr):SCCmec的结构复杂,因外来基因整合数量差异使其大小也不同,总体来说,它由两个部分组成:第1部分是特征性结构,存在于所有的MRSA中,包括:①保守的末端正序重复序列(directrepeat8equetlce,DR)和,或反序重复序列(invertedrepeat8equeilce,m),②m∞操纵子,③在mecA基因左右存在的保守的基因结构以及负责SCCmec移动的ocr【4.;第2部分是功能还未明或无功能区,有学者将其命名为](junkyard)区,即废弃,:①m∞操纵子类型和ocr型别;②,将NCTC10442结构定为I型,将N315的结构定为Ⅱ型,85/2082的结构定为Ⅲ型.(1)末端DB和m序列:SCCmec两端的DB和m,是耐甲氧西林葡萄球菌的特征性核苷酸序列,大小为10多个到20多碱基不等,DB的基本序列为:..5-1TATGATACGCI'TCT-3,-3;有的存在于mec的细菌染色体上,有的则存在于SCCmec的两端;不同菌株DB,IR的拷贝数和单一DB,IR的碱基数目存在一定差异,但DB与DB,IR与m之间的同源性很高;mec从菌细胞剔除时,两端的DR或m可以首尾相接,形成环状的染色体外DNA结构,闭环结构,后者又可以在染色体上的DB片段末端整合到细菌染色体中,因此,mec在菌细胞中传递C2,3,5】.(2)oor基因组及其分型:多数oor基因组由两rA和caB)与其相邻的ooS组成,rA,caB分别编码一长度约为449和542个氨基酸残基的多肽片段(m),在ccrA的上游有一个启动子和一个SD(Shine-dalgamo)序列——即富含G(guanosine)和A(adenosine),长度为5个核苷酸的序列,其功能是与核糖体16SrRNA的3端互补配对,使核糖体结合到mRNA上,为开始翻译做准备;而在caB的上游,虽也存在一个sD序列,但没有发现启动子,:C凹重组冀系统的氨中华微生物学和免疫学杂志2006年l2月第26卷第—ChinJMicaubiolImrmmol,Deemi~2006,Vol26,,有三分之一与转化,分解酶家族的重组酶相同,它们均属于位点特异性整合酶家族的重组酶,均含有特征性丝氨酸残基(它被认为在DNA链交换反:..应中提供羟基);r与转化,分解酶家族的重组酶还是有明显的区别,即前者拥有更多的羧基端(CO0H-),且在现有蛋白中,:,,;其中的阿拉数字1,2,3分别代表相应型别(I,Ⅱ,Ⅲ)rB,Ⅳ,,犹的3个亚型所携带的【7】.最近又从澳大利亚两株社区获得性hmsA(c(H砌IlIIity-∞liI|edMBSA,):oc,它是raec所携带,且其中只有arc基因,编码的rB编码蛋白质NH2端的约四分之一的氨基酸,mec进行整合和剔除】.(3),掀:操纵子及其分型:,掀:操纵子由插入子431,,犹,mecA基因和完整或部分删切的调节基因mecR1,,mecl为抑制基因,在通常情况下,mecl编码产生的抑制因子——MecI,结合在mecA基因的启动子部位,使ram4基因不能被转录;mecRl为调节基因,它在诱导剂,如:内酰***类抗生素的作用下编码产生诱导因子一MeeRI,能够去除MeeI对ram4的阻遏作用,使ram4得以转录而产生PBP2a.,掀:操纵子分型是依据,,—E5种主要的操纵:..子类型,,亚型的结构特点及意义(4)mec分型的关系:mec结构中除上述特征性片段外,余下区域被定义为J区,mec和细菌染色体结合点到ocr基因组之间的区段称为Jl,ocr基因组至ram4操纵子间的区段称为J2区,mec和细菌染色体结合点间的区段称为J3;虽说其中堆积的不是细菌生长所必需的基因,但位于插入子,转座子或质粒上的抗性基因,如:转座子~rlTn554,有镉抗性(.)基因,Ptl81质粒有四环素抗性,,孵转座子是银抗性基因,转座子rn554携带有编码红霉素,壮观霉素抗药性的基因等n五】,现在认为它们是细菌在进化过程中为适应环境,从外界获得的基因,,而其中携带mec类型的依据,如在Imec的Jl区含有特异性的基因,它编码胞浆素敏感性表面蛋白(§,),在Ⅱmec的Jl区含有特异性的钾依赖性操纵子(potassiumdependentopenm,Kdp),Ⅲmec的J2区含有假转座子54,在J3区含有质粒Ptl81和转座子Tn554;在V型中,存在有和hsdM基因等.(5)SCCmec分型:到目前为止,至少发现了5种SCCraec型别和3种亚型【3J.】,:Katayama等Ⅲ的研究结果证实,除在金黄色葡萄球菌菌株476中发现有不携:..组分(476),在多株血浆凝固酶阴性的葡萄球菌中也有发现,如人型葡萄球结构,12263,它raec两端的特征性结构DR,IR,,命名为o~t'Xh,它与金葡萄o,yX的同源性高达91%,SCC携带的ocr基~olIn'mind,December2006,Vol±N01rB高度相似,且编码的从结构完整,无缺失突变,12263的左端,存在多个限制性修饰系统的同源片段,,SCC是一个基因交换的载体,家族中携带有mecA基因的一个特例,MILSA的产生,是对甲氧西林敏感的金黄色葡萄球菌(methicillin-/.rt,y~,lV[SSA)通过SCC从其他菌株中获得mecA的结果,它同样可以使其他抗生素耐药基因在葡萄球菌间传递,,进行S0C删分型的意义MRSA已经成为医院及社区获得性感染的主要病原菌,因耐药率和耐药强度高,多重耐药谱广,由其引起的感染是目前临床最为棘手的难题,如果因为监测和控制不利,可以造成区域性或地区性暴发流行,其死亡率非常高,由此造成的经济损失和后果是不可想象的,这也是国外医疗机构对MRSA高度重视的主要原因,,是区分医院感染和社区获得性感染的一个重要指标,医院获得性的MRSA(health:..cam-associatedMRSA,H_),常常携带的是I,Ⅱ或Ⅲmec中的一种,(C.!IⅡ)或非多重耐药性耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌(nonmultiresistantoxaciUin-,Nc)菌株携带的是Ⅳmec,同时也是衡量菌株耐药性的一个重要标志;携带I型的菌株为原型株,含耐药基因少,除对f}-内酰***类抗生素耐药外对其他抗生素敏感,多重耐药率低;Ⅱ型菌株携带的耐药基因较I型多,耐药基因的数量和种类在不同的地区有区别;Ⅲ型菌株是携带耐药基因数量最多,多重耐药率最高的菌株,耐药谱在不同地区间区别很大;,可mec型别,分布情况及其耐药基因的携带现状,为预测耐药菌株的发展趋势,预防其暴发流行,治疗MILSA感染病例提供对策和科学依据;同时为探讨M1LSA的耐药机制,,OhtaT,UchiymmI,-dlli舶面妇m&,TakeuchiF,KamdaM,,,innoedete口血Ⅲ.nts0fhish,,in眦~ty-,2002,359(932O):1819-,OhnK,MaXX,∞*mtihiotic舶画吐lm∞0f&叩^,而删棚嬲格fIomitsmIe㈣:.gR∞i吱Updl吐,20O3,6(1):41-52.:..4l(|Y,hoT,,&叩^,而删∞啊嘣e曲加m呻咖∞,'辫,encodesmethicillinred黜~吐蛳ncein&Ⅲ叼tIH,200o,44(6):,l(|吐aY,A蚋daK,∞∞删ech∞m舢I'∞minmethidllin-r,,,,i~,,nt&∞0叫棚.,I曩罅…Antlmieznb^8em8ae-mother,加Ol,45(5):1323-Ⅸ~0fcelldivisionflxlndec~deacidlqpIi∞一donin&temperamm-semitivedeox~ddeacidsynthesisn-n眦0f函dIcol/.JBacteriol,l9I69,99(3):】o【,hoT,T/~tomC,*serechH_膏呲,,,,,m,lty-aequimdⅡllcmin-rant&(]aemod~,2OO2,46(4):】,MaXX,TakeuchiF,∞瞰ecbH啊膏峨,,辫drivenby趣novdca曩圮necbH啊膏a嘶n,c0Ⅱ山n越..Anfi~ca'ab^Omamdmr,2OO4,48(7):2637-,&:***@'amo]MedMicmbid,2lD06,46(1):(|吐aY,ItoT,∞ndiDg,,H.^:mle0fIS431-mediatedMc,ddetionine~e88ioll0f皇面吐眦in∞ot-eerty-ing,low-levdmbidIIiⅡ-抛面捌&叩∞0邮|Il'啊瑚Iil础…Antlm/一c∞0bA啦(】bⅢH,2001,45(46):1955-,Ck喈FN,O',|y瞳吐Ⅱ}le面吐眦&呼H邮棚职格related?A伽皿p|IIi蛐0ftheirI'l∞~,2OO3,35(4):336-343.:..12SheA,la,m,,eyAS,Keenecr,***柚柚舯meametteI'inmed~dllin-mdmnt&王D∞憾U埘嬲格bola~,',~b^黜a皿妇,.49(5):,mK,1walunvaK,Tumid~JD,Ⅱ一bi—dllin—mm'aimlt&c∞,210吆,4O(11):4289-~ymmlY,TaJkeuchiF,IloT,&medaici]lin-部帅晖&向南∞时朔矗0f柏activeinmah/I,-琴-leticel曩哪forthe&呼Hm邮a睡l瞰ed田叩∞眦I''ac(~c),which-intheme吐licillim妇m&i∞∽口mm-/sthe伪0fthensi-帆***@,2OO3,185(9):2711-Ⅲ时鼬K,X曲呵锄阻Y,腽鲋嘎H,-Illi嘲i幽毗&c叫蝴',加吆,292(2):67-74.(收稿日期l加嘶砌)