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察时间(天)℃外观澄清澄清澄清PEG-UOX5mg/mL电泳甘氨酸20mg/mL溶液活性PB40mmol/L-20℃℃℃外观澄清澄清澄清PEG-UOX5mg/mL电泳丙氨酸20mg/mL溶液活性PB40mmol/L-20℃℃℃外观澄清澄清澄清PEG-UOX5mg/mL电泳无降解无降解无降解甘氨酸20mg/-20℃℃外观澄清澄清澄清电泳无降解无降解有降解PEG-UOX5mg/℃甘氨酸20mg/mL外观澄清澄清澄清蔗糖15mg/-20℃外观修正生物医药(杭州)研究院有限公司-6-新药临床研究申报资料:..℃外观根据上述初步试验结果选择甘露醇、甘氨酸、磷酸缓冲液组成制剂处方,配制不同浓度的辅料冻干后考察外观(未进行系统考察)。当甘露醇浓度为15mg/mL、甘氨酸25mg/mL、PB为40mmol/L时,外观呈完整的“Cake”状,可依此结果进行进一步筛选。、处方研究处方样品浓度冻干、处方稳定性,25度、4度相关数据缺少。综合处方的稳定性考察和制剂规格,确定了注射用聚乙二醇化尿酸氧化酶的处方组成为(以1000mL计):聚乙二醇化尿酸氧化酶2500mg甘露醇15000mg甘氨酸25000mg十二水合磷酸氢二钠13600mg二水合磷酸二氢钠330mg配制上述处方的注射用聚乙二醇化尿酸氧化酶半成品并冻干制成制剂,分别测定半成品的最低共熔点和制剂的玻璃化转变温度Tg,结果见图(半成品的最低共熔点和制剂的玻璃化转变温度实验未做,结果无。)制剂液体药物混合物半成品的最低共熔点为℃,从℃开始,相转变已经开始,在冻干的第一阶段,温度不能长时间超过℃,以避免发生共熔现象和塌陷,这样才能使制剂具有很好的外观和保持蛋白样品的稳定性。制剂的玻璃化转变温度为℃,但玻璃化转变在℃时已经开始,这一结果要求冻干第二阶段样品温度不能长时间超过℃,而且样品长时间保存也不宜超过这个温度。修正生物医药(杭州)研究院有限公司-7-新药临床研究申报资料:..、工艺流程原液配料过滤除菌分装及加塞冷冻干燥压盖扎铝盖贴标签成品2、工艺说明聚乙二醇化尿酸氧化酶是蛋白质,其空间结构和酶活性易受环境条件的影响而改变,因此整个制剂制备过程应控制环境条件及所有溶液和容器的温度,温和操作,并采用滤膜无菌过滤后分装并冷冻干燥。干燥完毕,先压好内盖再出箱,以保证冻干制剂的水分含量合格。3、、,,加注射用水定容至1000mL,±。、配液根据处方及原液所含聚乙二醇化尿酸氧化酶的蛋白浓度,按1000mL量计准确算出所需的原液的体积,再算出需补加的甘氨酸、甘露醇、磷酸盐储液的量,并准确称量,加适量注射用水充分混匀后,然后缓慢加至2500mg聚乙二醇化尿酸氧化酶原液中并混匀,补加注射用水至1000mL(辅料及溶媒均预冷至4~10℃),。,PB为40mmol/L。、,检查澄明度。、,并盖塞。、冷冻干燥(样品冻干曲线缺少)分装好的半成品放入冻干机后设置搁板温度为-40℃使样品温度迅速降低,样品冻结。在样品温度降到接近-40℃时升高搁板温度开始第一个阶段的冻干。两个小时内样品温度变化情况(无图)。从图中可看出样品温度降低过程中在℃修正生物医药(杭州)研究院有限公司-8-新药临床研究申报资料:..,这是由于液态样品在降温过程中达到最低共融点时的放热过程导致样品温度升高。因此在冻干过程的第一阶段有大量水分存在的条件下样品温度不能超过最低共融点,以防止发生相变引起样品结构发生变化。在这一条件下样品温度越高,冻干速度越快。热分析表明样品在升温过程中℃时就开始发生相转变。将第一阶段搁板温度设为℃可使样品温度保持在℃左右。第一步干燥控制搁板温度为℃左右,干燥小时,第二步干燥控制搁板温度为℃,使样品温度低于℃,干燥小时左右结束冻干。、压内盖,出箱无菌条件下压盖,扎铝盖后即得成品。以上操作均在局部100级条件下进行。、、贴标签、装盒核对品名、规格、批号后,贴签并装盒。聚乙二醇化尿酸氧化酶原液:本公司自行研制,质量符合《注射用聚乙二醇化尿酸氧化酶中试产品制造和检定规程(草案)》的要求。甘氨酸:药用级,符合《中国药典》2015版标准。甘露醇:药用级,符合《中国药典》2015版标准。磷酸氢二钠:《中国生物制品主要原辅材料质控标准》,年版。磷酸二氢钠:《中国生物制品主要原辅材料质控标准》,年版。注射用水:符合《中国药典》2015版标准。质量标准见附件四。四、保存及有效期2~8℃保存,有效期两年(暂定)。五、文献资料1、孙东坡,胡一桥,蛋白质冷冻干燥制品中的保护剂及其保护机制药学进展,修正生物医药(杭州)研究院有限公司-9-新药临床研究申报资料:..,2003;2、陈光明,蛋白质药品冷冻干燥技术研究进展;3、李津、俞霆、董德祥主编,《生物制药设备和分离纯化技术》,化学工业出版社,2003年;4、梅兴国主编,《生物技术药物制剂—基础与应用》,化学工业出版社,2004年;5、FDA批准的部分聚乙二醇修饰生物制品的处方,见表10-5;原文见附件。编名称成分含量备注号pegloticase8mg/(pegloticase)***化钠150mmol/Lcertolizumabpegol蔗糖200mg/mL冻干粉乳酸吐温2CIMZIA(certolizumabpegol)certolizumabpegol醋酸钠200mg/mL预充式注射器***化钠注射用水methoxypolyethyleneglycol-epoetinbeta磷酸钠3Mircera硫酸钠甘露醇蛋氨酸泊洛沙姆18810mg/mL(蛋白pegfilgrastim含量)醋酸10mmol/L山梨糖醇50mg/mL4Neulasta(pegfilgrastim)预充式注射器吐温-(杭州)研究院有限公司-10-新药临床研究申报资料:..(pegaspargase)pegademasebovine250U/(pegademasebovine)***(干alfa-2a扰素量)/L180mcg/-***化钠8mg/±(peginteneronalfa-2a)peginteneron180μg/mL(干alfa-2a扰素量)/L180mcg/-***化钠8mg/±-2b无水磷酸氢二钠SYLATRON(peginterferon8二水磷酸二氢钠alfa-2b)吐温-80蔗糖注射用水9SOMAVERT–pegvisomant表10-5FDA已批准聚乙二醇修饰生物制品处方附件一、共熔点和玻璃化转变温度测定原始图谱。无附件二、部分FDA已批准聚乙二醇化生物制品说明书关于处方的部分内容。附件三、国外同类产品KRYSTEXXA说明书中文译文及原文。附件四、主要原辅材料质量标准。参考药典。修正生物医药(杭州)研究院有限公司-11-新药临床研究申报资料:..、共熔点和玻璃化转变温度测定原始图谱修正生物医药(杭州)研究院有限公司-12-新药临床研究申报资料:..、部分FDA已批准生物制品说明书关于处方的部分内容修正生物医药(杭州)研究院有限公司-13-新药临床研究申报资料:..、国外同类产品说明书中文译文及原文修正生物医药(杭州)研究院有限公司-14-新药临床研究申报资料:..、主要原辅材料质量标准修正生物医药(杭州)研究院有限公司-15-新药临床研究申报资料