文档介绍：血浆凝血酶激活的纤溶抑制物ELISA定量检测及意义
作者:李晓娜马德庆王立萍
凝血酶激活的纤溶抑制物(Thrombin activatable fibrinolysis inhibitor,TAFI)是近年来发现存在于血浆中的一种蛋白酶原,属于羧肽酶家族成员[1]。血液凝固时,TAFI被凝血酶-凝血酶调节蛋白复合物激活后,可特异性裂解与纤溶酶原有高亲和力结合位点的纤维蛋白羧基末端的赖氨酸残基,从而抑制纤溶酶原的活化,下调纤溶活性。作为凝血与纤溶新的调控因子,TAFI的发现在医学和生物学界引起了很大的兴趣。国外已进行了多项TAFI的研究,研究发现TAFI与多种疾病的病理状态,尤其是与血栓性疾病关系密切,血浆中高水平的TAFI是静脉血栓和心血管疾病的危险因素[2]。而国内对TAFI的研究甚少,为此我们用ELISA测定了50例健康人血浆中TAFI抗原(TAFI:Ag)水平,并建立了我们当地健康人群血浆TAFI∶Ag的参考值范围。
1 研究对象选择
选取我院体检中心2011年3月至2011年5月的50例年龄20-70岁之间排除心、脑血管疾病和肝肾疾病、体检正常的健康者,男31例,女19例。所有入选者检测前半个月内未使用抗凝药物,且无肝肾功能异常。
2 标本采集与处理
空腹静脉采血2份,其中一份注入凝血专用的试管,收集上层血浆置于-80℃保存备用;另一份注入生化专用的试管。
3 主要仪器和试剂
TAFI试剂盒均购自American Diagnostica公司(批号:873); Rayto RT-2100C酶标分析仪;罗氏7600全自动生化分析仪及配套试剂。
4 实验方法
A***平采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定
∶2,1∶4,1∶10,1∶20稀释。将不同稀释度的参考血浆,每孔加200μl,置37℃中孵育2h;倾倒尽孔中液体,用洗涤缓冲液300μl洗涤5次,甩干,加酶标抗体每孔200μl,置37℃中孵育1h;同上洗涤5次;TMB底物每孔200μl,室温放置5min,,每孔50μl,终止反应。酶标仪选择450nm波长进行读数,以各稀释度的TAFI为横坐标,相应的吸光度为纵坐标,建立标准曲线。
∶50稀释,其余操作同标准品,根据标准曲线上的吸光度值可换算出待测样品中TAFI∶Ag的含量。
、肝肾功能均在罗氏7600全自动生化分析仪上测定。
5 数据处理与统计学分析
,计量资料以均数±标准差表示,采用正态分布法估计正常参考值范围。
6 结果
,计算TAFI∶%。
上一页1 2下一页
TAFI∶Ag线性范围为5%~150%;测定结果与TAFI∶ 219,说明检测结果与TAFI抗原呈良好的线性相关。
,TAFI∶%。