文档介绍：酶联免疫吸附试验(ELISA)手工操作注意事项
酶免疫测定类型
这种固相酶免疫测定方法在1971年最初建立时称为酶联免疫吸附剂测定(Enzyme Linked ImmunoSorbent Assay),简称ELISA。
酶免疫技术
酶免疫组化
酶免疫测定
均相酶免疫测定
非均相酶免疫测定
固相酶免疫测定
液相酶免疫测定
ELISA原理(以一步法双抗体夹心法测抗原为例)
ELISA其原理为抗原抗体特异性结合和抗原抗体的酶标记,以酶催化底物显色来判断结果。
影响酶联免疫测定的因素较多, 诸如标本的采集保存、试剂的准备、加样的技术、孵育温度的控制、洗涤反应板的方式、显色反应时间的控制等一系列问题均有可能对试验结果产生很大的影响, 只有避免了这些因素, 才能保证试验结果的准确性和可靠性。
一、移液枪的使用
1. 样品准备
(1) 吸样之前要保证移液枪、枪头和液体处于相同温度。置于冰箱保存的样品应提前取出,室温放置,使温度平衡后再吸样。
液体温度> 吸头温度的移取的液体体积会偏大
液体温度< 吸头温度的移取的液体体积会偏小
(2) 若溶剂瓶中液体太少,可倒入EP管中,方便吸取。
3. 装枪头
将移液枪端垂直插入吸头,左右微微转动,上紧即可
上下敲击会引起内部的零部件因瞬间强烈撞击而松散,
甚至会导致调节刻度的旋钮卡住
4. 吸液
(1) 垂直吸液,枪头吸嘴尖端需浸入液面2-4mm以下。
(2) 枪头吸嘴预润湿(2-3次),使吸嘴内壁液体吸附达到饱和,再吸入样液,最后打出液体的体积会很精确。
一般液体,正向吸液(一档二档)。
粘稠液体和易挥发液体,可反相吸液(二档一档)。
正向吸液
反向吸液
(3) 缓慢吸取,控制好弹簧的伸缩速度。吸液速度太快会产生反冲和气泡,导致移液体积不准确和腐蚀枪体。
(4) 吸取后将移液枪提离液面,停约一秒钟,观察是否有液滴缓慢地流出。若有流出,说明有漏气现象(原因有:枪头未上紧;枪头不匹配;移液枪内部气密性不好)。
(5) 吸嘴外壁残留液滴可沿壁靠去或用滤纸蘸擦。