文档介绍：液相色谱实用技术色谱柱的使用和保养
极性问题
分配色谱的分离机理
分配色谱概述
反相色谱的主要类型,基于分子的极性分离
洗脱次序:一般为反相,即极性高的先被洗脱
常用的流动相:
有机溶剂如甲醇、乙***,四氢呋喃,水
应用添加剂,成为离子对、离子抑制方法
常用固定相:
碳十八、碳八、***基、***基,二醇基等基团
反相色谱固定相大多数为键合相
键合相色谱柱
以硅胶为基质,通过化学键合方式把碳十八、碳八、***基等基团联在基质上,作为固定相。
优点∶
固定相稳定,不易流失
应用广泛,可使用多种溶剂
消除硅羟基的不良影响
缺点∶
pH值不能小于2或大于8
同样填料,各种牌号色谱柱不尽相同
pH对色谱柱的影响
填料的稳定性
硅胶填料
pH:2-8
pH值大于7时键合相溶解
pH值小于2时键合相水解
经常用缓冲液
固定相降解
聚合物填料
pH:2-12或0-14
色谱柱的选择
非极性或极性较小的样品可用一般的C18柱
酸碱性的化合物建议选用填料经封尾钝化过的C18柱,PH范围2-9(12)
糖类,氨基酸,有机酸,多环芳烃,GPC有专用柱
良好的色谱实验****惯
拿到一根新色谱柱时,先测柱效
保留在新色谱柱上测得的色谱图,并记录条件
定期检测柱效
色谱柱的使用及操作
流动相的转换
特别是GPC柱
流速(压力)的变化幅度
温度的变化幅度
专用色谱柱∶样品及溶剂的要求
色谱柱的保养(一)
样品方面
除去微粒及杂质
了解样品在流动相中的溶解度
如样品的溶剂不是流动相,一定要用流动相试溶解度,防止其在流动相中析出
了解样品与色谱柱的基质/填料是否相互作用