BCA蛋白定量.doc

文档介绍：凯基BCA蛋白含量检测试剂盒
Cat Number:KGPBCA For Research Use Only
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一、   试剂盒说明
BCA蛋白浓度测定试剂盒(BCA Protein Assay Kit)是根据目前世界上最常用蛋白浓度检测方法之一BCA法研制而成,实现了蛋白浓度测定的简单,高稳定性,高灵敏度和高兼容性。检测浓度下限达到25微克/毫升,,待测样品体积为1~20微升。
二、   试剂盒组份
组份
Cat: KGPBCA试(100 assay酶标板/20assay 1mL比色杯)
Cat: KGPBCA (250 assay酶标板/50assay 1mL比色杯)
蛋白标准溶液(0. 5 μg/μL )
2 mL
5 mL
BCA试剂A
20 mL
25 mL×2
BCA试剂B

1mL
三、      操作步骤
A.   酶标板操作
1.      标准曲线的绘制:取一块酶标板,按照下表加入试剂
孔号
0
1
2
3
4
5
6
7
蛋白标准溶液(μL)
0
1
2
4
8
12
16
20
去离子水(μL)
20
19
18
16
12
8
4
0
对应蛋白含量(μg)
0







2.      根据样品数量,按50体积BCA试剂A加1体积BCA试剂B(50:1)配制适量BCA工作液,充分混匀;
3.      各孔加入200μL BCA工作液;
4.      把酶标板放在振荡器上振荡30sec,37℃放置30分钟,然后在562nm下比色测定。以蛋白含量(μg)为横坐标,吸光值为纵坐标,绘出标准曲线;
5.      稀释待测样品至合适浓度,使样品稀释液总体积为20μL,加入BCA工作液200μL,充分混匀,37℃放置30分钟后,以标准曲线0号管做参比,在562nm波长下比色,记录吸光值;
, 6.      根据所测样品的吸光值,在标准曲线上即可查得相应的蛋白含量(μg),除以样品稀释液总体积(20μL),乘以样品稀释倍数即为样品实际浓度(单位:μg/μL)。
B.   分光光度计测定
1.        标准曲线的绘制:各管按照下表加入试剂
孔号
0
1
2
3
4
5
6
7
蛋白标准溶液(μL)
0
5
10
20
40
60
80
100
去离子水(μL)
100
95
90
80
60
40
20
0
对应蛋白含量(μg)
0







2.        根据样品数量,按50体积BCA试剂A加1体积BCA试剂B(50:1)配制适量BCA工作液,充分混匀;
3.        各管加入1000μL BCA工作液;
4.        各管充分混匀,37℃放置30分钟,然后在562nm下比色测定。以蛋白含量(μg)为