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《DNA的粗提取与鉴定》课件(新人教版选修1).ppt

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《DNA的粗提取与鉴定》课件(新人教版选修1).ppt

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B
A
讨论3:怎样才能将细胞内的这些物质分离出来?
讨论1:构成生物体的遗传物质是什么?
提取DNA的方法
1、提取生物大分子的基本思路
2、生物大分子
3、提取DNA的基本思路
选用一定的物理或化学方法分离具有不同物理或化学性质的生物大分子
主要指蛋白质、酶和核酸
利用DNA与RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面的差异,提取DNA,去除其他成分
(1)DNA的溶解性
1
DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同,利用这一特点,选择适当的盐浓度就能使DNA充分溶解,而使杂质沉淀,或者相反
2
当氯化钠的物质的量浓度为 2 mol/L时,DNA的溶解度最大,浓度为 0.14 mol/L时,DNA的溶解度最低。利用这一原理,可以使DNA在盐溶液中溶解或析出
3
如何通过控制NaCl溶液的浓度使DNA在盐溶液中溶解或析出?
(2)DNA在酒精溶液中的溶解性
DNA不溶于酒精溶液,但是细胞中的某些物质则可以溶于酒精。利用这一原理,可以将DNA与蛋白质进一步分离
(3)DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性
①蛋白酶能水解蛋白质,但是对DNA没有影响
②大多数蛋白质不能忍受60-80°C的高温,而DNA在80°C以上才会变性
③洗涤剂可以溶解细胞的细胞膜,去除脂质和蛋白质,但对DNA没有影响
甲基绿 (绿色)
DNA的鉴定
在沸水浴中, DNA遇二苯胺会染成蓝色,因此,二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂
01
02
03
04
实验材料的选取
破碎细胞,获取含DNA的滤液
除去滤液中的杂质(纯化)
DNA的析出与鉴定
二、实验设计
(一)实验材料的选取
材料:鱼卵、猪肝、菜花、香蕉、鸡血、哺乳动物的红细胞、猕猴桃、洋葱、豌豆、菠菜、在液体培养基中培养的大肠杆菌。(从中选取2~3种实验材料)
原则:选用DNA含量相对较高、容易提取的生物组织。
鸡血
合适的材料:
原因:一是鸡血细胞核的DNA含量丰富,材料易得;二是鸡血细胞极易吸水涨破。
动物细胞的破碎较易,例如,在鸡血细胞液中加入一定量的蒸馏水 ,同时用玻璃棒搅拌,过滤后收集滤液即可
答:蒸馏水对于鸡血细胞来说是一种低渗溶液,水分可以大量进入血细胞内,使血细胞胀裂,<再加上搅拌的机械作用,就加速了鸡血细胞的破裂(细胞膜和核膜的破裂),>从而释放出DNA。
讨论:为什么加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂?
01
02
03
(二)破碎细胞,获取含DNA的滤液
1、动物细胞
2、植物细胞
①植物细胞需要先用一定的洗涤剂和食盐溶解细胞膜
②实例:提取洋葱DNA时,在切碎的洋葱中加入一定的洗涤剂和食盐,进行充分的搅拌和研磨,过滤后收集研磨液
讨论:加入洗涤剂和食盐的作用分别是什么?
答:洗涤剂是一些离子去污剂,能溶解细胞膜,有利于DNA的释放;食盐的主要成分是NaCl,有利于DNA的溶解