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摘要
随着科学技术的不断进步，新型复合材料在骨组织工程方面的应用愈加广泛。本文中，我们探讨了一种新型的PLA-PEGHA-g-PLLA复合材料，并对其进行了体外成骨研究。研究结果表明，该复合材料对于成骨细胞有良好的相容性，能够促进成骨细胞的生长和扩增，同时也能促进成骨细胞的分化和骨组织的生成。
关键词：复合材料，PLA-PEGHA-g-PLLA，成骨，体外研究
引言
骨组织工程是一种结合材料学、生物学和力学学等学科的交叉学科，旨在用生物相容材料和成骨细胞构建骨组织。在骨组织工程中，材料的选择尤为重要，因为它直接影响到成骨细胞的生长和分化。在过去的几十年中，人们已经探索出了许多生物相容材料，并对它们进行了各种改进和修饰，以进一步提高它们在骨组织工程中的表现。
PLA-PEGHA-g-PLLA是一种新型的复合材料，由聚乳酸（PLA）、聚乙二醇（PEG）羟基磷灰石（HA）和聚乳酸-聚乙二醇-聚乳酸三嵌段共聚物（PLLA）组成。它的独特材料结构使其拥有良好的生物相容性和生物可降解性，同时也拥有优异的力学性能。因此，PLA-PEGHA-g-PLLA复合材料在骨组织工程方面具有广阔的应用前景。
本研究旨在探讨PLA-PEGHA-g-PLLA复合材料在体外成骨方面的表现，并提高该材料在骨组织工程中的应用。
实验方法
材料的制备
PLA-PEGHA-g-PLLA复合材料的制备方法如下：先将PLA和PEGHA混合均匀，然后将PLLA加入混合物中，进行振荡混合，直至得到均匀的混合物。最后，将混合物置于真空烘箱中，干燥72小时。
成骨细胞的分离和培养
从小鼠骨组织中分离出成骨细胞，并以L-DMEM培养基作为基础培养基，添加10％胎牛血清（FBS），1％斯特雷普霉素/链霉素，1％L-谷氨酰胺，以及50μg/mL 2-龙腺啶。细胞在37℃下以5％CO2的条件培养，至细胞密度达到60％-70％后用3 mL/L的乙醇进行消毒。将PLA-PEGHA-g-PLLA复合材料分成不同的组别，将不同的组别加到成骨细胞中培养。
MTT实验
MTT实验用于评估PLA-PEGHA-g-PLLA复合材料对成骨细胞的毒性。将成骨细胞移植到96孔板的不同孔中，分别加入PLA-PEGHA-g-PLLA复合材料及其不同浓度的稀释液，处理48小时。随后，，于37℃下孵育4小时。将细胞上清吸干，加入150 μL DMSO。最终，通过ELISA检测紫色产物的吸光度。
ALP检测
ALP检测用于检测PLA-PEGHA-g-PLLA复合材料对成骨细胞成骨分化的影响。将成骨细胞移植到不同的试管中，分别加入PLA-PEGHA-g-PLLA复合材料及其不同浓度的稀释液，培养10-14天。随后，免疫化学染色检测ALP的表达情况。
ALP活性测定
ALP活性测定用于进一步评估PLA-PEGHA-g-PLLA复合材料是否能用于成骨细胞成骨分化。将成骨细胞加到96孔板中，密度为2×10^4/mL。分别加入PLA-PEGHA-g-PLLA复合材料及其不同浓度的稀释液，处理10-14天。随后，用p-nitrophenyl phosphate（pNPP）测量ALP活性。
结果与讨论
MTT实验结果表明，PLA-PEGHA-g-PLLA复合材料对成骨细胞没有毒性作用。此外，该复合材料能够增加成骨细胞的活性，促进细胞增殖和生长。
ALP检测结果表明，PLA-PEGHA-g-PLLA复合材料能够显著促进成骨细胞的成骨分化，并且该促进作用呈浓度依赖性。
ALP活性测定结果表明，PLA-PEGHA-g-PLLA复合材料能够明显增加成骨细胞的ALP活性，证明该复合材料能够促进成骨细胞向成骨细胞的分化，并进一步促进骨组织的生成。
结论
本研究表明，PLA-PEGHA-g-PLLA复合材料能够促进成骨细胞的生长和分化，增加细胞活性，并能促进骨组织的生成。这为PLA-PEGHA-g-PLLA复合材料在骨组织工程方面的应用提供了可靠的理论基础。虽然体外成骨研究是骨组织工程的重要组成部分，但进一步的体内研究依然是必要的。因此，我们将在未来的研究中进一步探索PLA-PEGHA-g-PLLA复合材料在体内成骨过程中的表现。