文档介绍：第7章食品生物工程下游技术
(五) 精细纯化
层析√
电泳
电泳:
原理:蛋白质是两性大分子,在一定的pH缓冲液中,蛋白质带正、负电或者不带电。在电场作用下,带正电荷的蛋白质移向负极,带负电荷的蛋白质移向正极,处于等电点的蛋白质不移动。两性大分子分离开来。
凝胶电泳√
凝胶电泳:
琼脂糖凝胶电泳:分离DNA 常规PCR产物的跑胶鉴定
聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE):分离蛋白质
聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE):
不同浓度的PAGE有不同的孔径,浓度越高孔径越小。
不连续式PAGE:上层PAGE浓度较低,浓缩胶;
下层PAGE浓度较高,分离胶。
蛋白质电泳过程:
电荷影响,带负电荷越多,移动越快;
相对分子质量:相对分子质量越大,移动越慢;
分子筛效应,相对分子质量越大,移动越快。
SDS-PAGE
eo/2007/
电场力
SDS-PAGE:
SDS-PAGE:在聚丙烯酰胺凝胶系统中(样品和缓冲液中)加入SDS后,则蛋白质分子的电泳迁移率主要取决于它的分子量大小。
SDS是一种阴离子去污剂,它能破坏蛋白质分子之间以及其它物质分子之间的非共价键。解聚后的蛋白质分子与SDS充分结合形成带负电荷的蛋白质-SDS复合物,复合物所带的负电荷大大超过了蛋白质分子原有的电荷量,消除了不同蛋白质分子之间原有的电荷差异。
蛋白质-SDS复合物在溶液中的形状像一个长椭圆棒。椭圆棒的短轴对不同的蛋白质亚基-SDS复合物基本上是相同的,长轴的长度则与蛋白质分子量的大小成正比,因此这种复合物在SDS-PAGE系统中的电泳迁移率主要取决于椭圆棒的长轴长度即蛋白质及其亚基分子量的大小。当蛋白质的分子量在15-200kD之间时,电泳迁移率与分子量的对数呈线性关系。由此可见,SDS-PAGE不仅可以分离鉴定蛋白质,而且可以根据迁移率大小测定蛋白质亚基的分子量。
在聚丙烯酰胺凝胶系统中(样品和缓冲液中)加入SDS后,则蛋白质分子的电泳迁移率主要取决于它的分子量大小
其他电泳技术:
等电点聚焦电泳:分离所带电荷大小不同的蛋白质
二维电泳(Two-Dimensional Electrophoresis ):
结合了等电聚焦技术和SDS-PAGE凝胶电泳技术。这两项技术结合形成的二维电泳是分离分析蛋白质最有效的一种电泳手段。