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医学资料 流式细胞术原理及临床应用 学习课件.ppt

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医学资料 流式细胞术原理及临床应用 学习课件.ppt

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流式细胞术(flow cytometry FCM)是利用流式细胞仪对单个生物颗粒(红细胞、白细胞、各类组织细胞、血小板、微生物等)以及人工合成微球的物理和生物学特性进行多参数定量分析,并能对特定细胞群体加以分选的分析技术。
流式细胞术的概念
流式细胞术特点
快速检测流动的单细胞或颗粒,达上万个/每秒
检测物可以是细胞、细菌或各种微粒, - 50 mm范围内
多参数同时分析,FS/SS/FLs (荧光)
可分析,可分选
特 点
FCM的工作原理
流式细胞仪组成:
:样本被制备成单个细胞的悬液,经荧光染料标记的抗体染色后置入样品管中,在气体压力下使其形成单细胞液柱。
:由激发光源、分光镜、光束成形器等组成。
散射光信号:
前向散射光( FS):在激光束正前方,用于检测细胞或其他粒子物体的表面属性,反映细胞颗粒的大小。
侧向散射光(side scatter, SS):与激光束垂直方向,主要用于检测细胞内部结构属性,反映颗粒的内部结构复杂程度、表面的光滑程度。
荧光信号:每种荧光染料都有特定的激发波长,受激光激发后会产生特定波长的荧光和颜色。流式细胞仪利用不同波长的光学滤片来检测这些特定发射波长的光学信号。荧光信号反映被染上荧光的细胞数量多少。
FCM的工作原理
流式细胞仪组成:

通过检测散射光及荧光信号对实验数据进行分析、存储、显示。
可用流式细胞仪分析的标本
外周血、骨髓、癌组织、癌旁组织、各种体液(尿、脑脊液、胸腹水、肺泡灌洗液等)
必需制备成单细胞悬液
单细胞生物、特殊处理的植物细胞、某些非细胞粒子、可溶性分子
流式细胞仪的基本功能
细胞表型分析:包括细胞膜、胞浆内蛋白表达及核膜成份分析
DNA含量及细胞周期分析、细胞凋亡检测
目标细胞分选
自身免疫性疾病相关HLA抗原分析、自身抗体的检测
流式蛋白定量技术:血浆中各种细胞因子的含量
临床免疫学
临床血液学
临床肿瘤学
血栓与止血
骨髓和器官移植
基础医学研究
流式细胞术的临床应用
(一)FCM在临床免疫学中的应用
机体免疫状态是衡量机体是否罹患疾病的重要指标,采用流式细胞术来检测淋巴细胞亚群,评估机体的免疫状态。