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目的:通过检测大鼠下丘脑神经细胞及卵巢/睾丸细胞凋亡相关基因的相对表达水平,探讨出生前DEHP暴露对子代大鼠神经系统及生殖系统毒性的潜在作用机制。方法:32只健康SD孕鼠随机均分为对照组(玉米油溶剂对照)和2 mg/kg、10mg/kg、50 mg/kg DEHP染毒组,每组8只。
于孕14天(gestation day 14,G14)-G19给予孕鼠每天1次灌胃染毒。仔鼠出生后,每窝随机选取雌雄大鼠各1只24h内处死,其余大鼠由母乳喂养至3周后断乳并雌雄分笼正常饲养,于10周龄时,每窝随机选取雌雄子代大鼠2只,其中1只断头处死,另一只多聚甲醛灌流固定后处死。
采用实时荧光定量PCR检测新生大鼠下丘脑神经细胞、成年大鼠视前区(preoptic area,POA)组织、成年大鼠卵巢/睾丸组织凋亡相关基因Bcl-2、Bax、Caspase-3的相对表达水平,采用TUNEL法检测成年大鼠POA细胞凋亡情况。结果:-3、Bcl-2、Bax表达水平以及Bcl-2/Bax比值的差异均无统计学意义(P>)。
-3、Bcl-2、Bax表达水平以及Bcl-2/Bax比值的差异也均无统计学意义(P>)。-2基因表达水平的差异无统计学意义(P>);Bax基因表达水平的差异有统计学意义(P<),与对照组相比,2 mg/kg、10 mg/kg剂量组Bax基因表达水平均下降,差异均有统计学意义(P<),而50 mg/kg剂量组Bax基因表达水平与对照组相比差异无统计学意义(P>);各组间Bcl-2/Bax比值的差异也有统计学意义(P<),与对照组相比,10 mg/kg剂量组Bcl-2/Bax比值升高,差异有统计学意义(P<),而2mg/kg和50 mg/kg剂量组Bcl-2/Bax比值与对照组相比差异无统计学意义(P>)。
-2基因表达水平的差异有统计学意义(P<),与对照组相比,2 mg/kg、10 mg/kg及50 mg/kg剂量组Bcl-2基因表达水平均下降,差异均有统计学意义(P<);各组间Bax基因表达水平的差异也有统计学意义(P<),与对照组相比,2 mg/kg、10 mg/kg及50 mg/kg剂量组Bax基因表达水平均下降,差异均有统计学意义(P<);各组间Bcl-2/Bax比值的差异也有统计学意义(P<),与对照组相比,2 mg/kg、10 mg/kg剂量组Bcl-2/Bax比值升高,差异均有统计学意义(P<),而50 mg/kg剂量组Bcl-2/Bax比值与对照组相比差异无统计学意义(P>)。。
-2、Bax基因表达水平以及Bcl-2/Bax比值的差异均无统计学意义(P>)。-2、Bax基因表达水平的差异均无统计学意义(P>);Bcl-2/Bax比值的差异有统计学意义(P<),与对照组相比,10mg/kg和50 mg/kg剂量组Bcl-2/Bax比值均下降,差异均有统计学意义(P<),而2mg/kg剂量组Bcl-2/Bax比值与对照组相比差异无统计学意义(P>)。
结论:,未发现出生前暴露DEHP对新生子代大鼠下丘脑组织细胞凋亡相关基因表达水平有影响。,未发现出生前暴露DEHP对成年子代大鼠POA脑组织有促细胞凋亡作用。
-2/Bax基因比值,可能对成年后子代雄性大鼠睾丸生殖细胞具有致凋亡作用;但并未观察到其对成年子代雌性大鼠卵巢组织凋亡相关基因表达的影响。