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酶联免疫吸附测定法是一种常用的生物技术，可用于检测各种病毒、细胞和蛋白质。地黄黄斑病毒（Tomato spotted wilt virus，TSWV）是一种重要的植物病毒，能感染多种作物如番茄、辣椒等，导致减产和质量降低，严重病例还会致死。因此，TSWV的检测和控制非常重要。本文将介绍如何使用酶联免疫吸附测定法检测TSWV。
一、TSWV的特征
地黄黄斑病毒是一种单股RNA病毒，属于病毒颗粒椭圆形。病毒颗粒 直径约为80纳米， kb。TSWV是一种分布广泛的病毒，能感染多种作物，导致叶片、茎干、果实等植物部位的病害。其病征包括叶片、果实等部位呈现黄化、褐化、病斑等症状，对植物的生长发育和产量产生极大的影响。
二、酶联免疫吸附测定法的原理
酶联免疫吸附测定法是一种敏感的免疫分析方法，广泛应用于病毒、细胞和蛋白质的检测。其基本原理是利用抗原与抗体在特定条件下的结合来检测待测物质的定量或定性。试剂盒中通常包含有硫酸钠（Na2SO4）等物质，用于沉淀植物样本中的蛋白质，避免其对检测结果的影响。TSWV样品在经过处理后，把样品均匀平铺在酶标板上，再加入先前制备的抗TSWV抗体、生物素化辣根过氧化物酶（Biotinylated Horseradish Peroxidase，HRP）标记的二抗和酶标板凝集素素（Streptavidin，SA）-HRP标记的素，形成TSWV-抗体-生物素-酶标板凝集素素-辣根过氧化物酶的复合物，在特定条件下，进行光学测定。从而检测样品中是否存在TSWV抗原。
三、步骤
酶联免疫吸附测定法步骤如下：
，加入酶联免疫吸附测定试剂盒中的硫酸钠、磷缓冲液等溶液，离心沉淀植物中的蛋白质。
，加入10倍样品冲洗缓冲液，轻轻振荡，离心，去掉上清，重复冲洗3次。
，室温下孵育30分钟。
，离心干燥。将试剂盒中Bi-HRP标记的二抗加入，室温下孵育30分钟。
，离心干燥。加入试剂盒中的Strepd-HRP标记的素，室温下孵育30分钟。
，离心干燥。加入试剂盒中的TMB染色剂，室温下反应10-15分钟。
，测量吸光度。
四、优缺点
酶联免疫吸附测定法具有高灵敏度、高特异性、易于操作、快速等优点。还可以同时检测多个样品，适用于病毒和蛋白的检测。但是，酶标板试剂盒的价格相对较高，而且需要特殊设备才能进行操作，目前主要用于专业实验室和研发单位。
五、结论
酶联免疫吸附测定法是一种简便、快速、灵敏、特异性高的检测方法，可用于TSWV的检测及其它病毒和蛋白的检测。它为研究和控制TSWV提供了强有力的技术支持。