文档介绍：猪肉中的瘦肉精检测——整体解决方案
猪肉中克伦特罗的检测
全自动固相萃取-定量浓缩仪,HPLC整体解决方案
摘要:使用LabTech公司全自动固相萃取仪-定量浓缩系统对经提取的猪肉样品提取液进行固相萃取—洗脱液浓缩—溶剂置换过程,简单高效,重现性好;经高效液相色谱检测克伦特罗,准确快速,标准曲线线性系数为:R2=,%,RSD:%。
关键词:克伦特罗固相萃取定量浓缩高效液相色谱
盐酸克伦特罗是一种β-兴奋剂,猪食用后在代谢过程中促进蛋白质合成,加速脂肪的转化和分解,提高了猪肉的瘦肉率,因此称为瘦肉精。它用量大、使用的时间长、代谢慢,所以在屠宰前到上市,在猪体内的残留量都很大。这个残留量通过食物进入人体,就使人体渐渐地中毒,积蓄中毒。如果一次摄入量过大,就会产生异常生理反应的中毒现象,因此而被禁用。某些国内养猪户不顾农业部的规定,为了使猪肉不长肥膘,在饲料中掺入瘦肉精。
本实验使用LabTech公司全自动固相萃取仪-定量浓缩系统进行样品前处理工作,样品经提取、初步净化后,全自动完成猪肉样品的固相萃取-洗脱液浓缩-溶剂置换过程,最终样品可直接用于液相检测,极大的简化实验人员的工作步骤,液相色谱检测准确,样品测定平行性好,回收率高。
1 仪器与试剂
仪器
LabTech PrepElite-VS 全自动固相萃取-定量浓缩仪
LabTech LC600二元梯度高效液相色谱系统
试剂
乙酸乙酯
10% 碳酸钠溶液
mol/L 的盐酸溶液
mol/L 氢氧化钠溶液
甲醇(色谱级)
4% 氨水甲醇
去离子水
2 实验方法
提取方法:
将50 g 猪肉,平均分成10份,准确进行称重。取其中5份加入15 mL 乙酸乙酯、3 mL 10% 碳酸钠溶液置于50 mL 离心管中,10,000 rpm 下均质2 min,6,000 rpm 下离心2 min,将上清液转入另一离心管中。用15 mL 乙酸乙酯重复提取残渣,合并乙酸乙酯。向乙酸乙酯提取液中加入
5 mL mol/L 的盐酸溶液,涡旋混合1 min,然后在6,000 rpm 下离心1 min,收集下层水相。重复萃取一次,合并下层水相, mol/L 氢氧化钠溶液调节pH 。取另外5份,,按上述方法进行提取操作,作为加标样品。
样品净化
SPE 小柱: ProElut PXC 90 mg/6 mL
a 活化: 甲醇、 mL mL 30 mmol/L 盐酸,对SPE柱进行活化;
b 上样: 将提取液加入小柱中,流出液弃去;
c 淋洗: mL mL 甲醇淋洗,氮气吹干10min;
d 洗脱: mL 4% 氨水甲醇洗脱;
e 在线浓缩 50 ºC 下在线浓缩,进行流动相(甲醇+水=35:65)置换,自动定容到1mL。
图1 PrepElite-VS 方法设定界面
样品检测
色谱柱:C18柱,250mm×,5μm
流动相:甲醇:水=35:65
流速:1mL/min
进样量:20μL
紫外检测器