文档介绍：湖南科技学院本科毕业论文(设计)开题报告书
论文(设计)题目
产纤维素酶真菌的分子生物学鉴定
作者姓名
周斌
所属系、专业、年级
生命科学与化学工程系06级生物2班
指导教师姓名、职称
黄光文副教授
预计字数
10000
开题日期
2010-3-24
选题的根据:
1)说明本选题的理论、实际意义
利用ITS进行菌种鉴定是目前较多采用的方法。传统真菌的分类、鉴定主要是基于营养体和子实体的形态学特征并结合其生理生化性状的描述。但是真菌形态特征容易受到培养条件和其他因素的影响,而且许多子实体类型经常难以获得,传统的分类方法不能满足某些菌种的分类要求。由于ITS 的序列分析能实质性地反映出属间、种间以及菌株间的碱基对差异,此外ITS 序列片段较小,人们可以从不太长的序列中获得足够的信息,易于分析,目前已被广泛应用于真菌属内不同种间或近似属间的系统发育研究中。
ITS是内源转录间隔区(Internally Transcribed Spacer)的英文缩写,位于rRNA编码基因18S,。其优点有:具有高拷贝数,整个序列的长度在500-800bp,利用rDNA通用引物能够很容易被扩增出来;同时包含保守与变异序列,能根据保守序列中的变异位点设计特殊引物进行特异性扩增比较rRNA基因(rDNA)在微生物的鉴定应用中,具有检测微生物种水平的多态性特征这些rDNA高度保守地分布在染色体的不同位置,在每个单倍染色体基因组中的拷贝数超过200个,这使得保守区域能够很容易被扩增出来1每个重复的rDNA序列的存在方式为由一前一后的18SrDNA小亚基单元(SSU),5。8SrDNA,28SrDNA大亚基单元(LSU)组成,已设计出通用引物来扩增ITS序列分析相关真菌种水平之间的差异。
本课题旨通过真菌通用引物ITS1和ITS4对真菌保守序列的扩增,以及运用Genbank软件对扩增的片段的同源序列的对比分析以确定待测菌种的种属。
2)综述国内外有关本选题的研究动态和自己的见解
White等1990 年首先设计ITS 引物对真菌核内核糖体RNA 基因进行扩增以来,ITS 序列分析技术在真菌分类、鉴定的研究中应用越来越广泛。
唐建辉等根据核糖体转录间隔区ITS 的通用引物(ITS1/ITS4), 扩增西瓜炭疽病菌的ITS 区段, 并将其序列和GeneBank 中登录的炭疽属24个种的ITS 序列进行比较,分别建立ITS1、ITS2 聚类分析图,探讨炭疽属的系统发育情况。
陈玉玺等探索镰刀菌菌株间的系统发育关系通过对分离到的镰刀菌菌株进行ITS 序列测定, 采用邻接法构建相关菌株的ITS 序列系统发育树。结果表明,各分支内序列相似性较高,而不同分支间菌株序列相似性较低。
陈永青等采用随机扩增多态性DNA 技术和核糖体ITS 序列分析,对22 种拟茎点霉共34个菌株进行了系统发育研究,结果表明,两种技术用于拟茎点霉的亲缘关系分析和种类鉴定是可行的。杨雅云等对马铃薯及番茄晚疫病菌的核糖体DNA 的ITS 区段序列分析表明,相似的序列使得生物学特性也很相似,从而确定它们的亲缘关系也就近。
国外这方面的研究起步较早,发展迅速,而且研究的范围比较广泛,主要集中在黑粉菌、疫霉菌、轮枝菌等植物病原菌的分类和系统发育研究上。在