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【摘要】 目的采用反相高效液相色谱法测定竺黄复方片中甘草酸的含量。方法采用kromasil C18柱，以甲醇- mol·L-1乙酸铵-冰乙酸为流动相，流速1 ml·min-1，柱温30 ℃，检测波长250 nm。结果在～ μg之间，峰面积与进样量的线性关系为A= 673 8C -67 6，平均回收率为％。测得3批样品中甘草酸的含量分别为，和 mg/片。结论所建方法简便、准确、重复性好，可用于竺黄复方片的质量控制。
【关键词】 竺黄复方片； 甘草酸； 反相高效液相色谱法
Abstract：ObjectiveTo establish an HPLC method to determine glycyrrhizic acid from prescription of Zhuhuang column was kromasil C18 (200 mm× mm,5 μm), the mobile phase consisted of Methanol～ mol·L-1Ammonium acetate- Glacial acrtic acid (65:35:1), with the flow rate of 1 ml·min-1 and the UV detector was set at 250 method showed a good range of ～ μg (r= 8).The average recovery was %.The glycyrrhizic acid contents of three batch samples were , ， mg, method is simple, accurate, repeatable and suitable for the determination of glycyrrhizic acid in prescription of Zhuhuang Tablet.
Key words：Prescription of Zhuhuang Tablet； Glycyrrhizic acid; RP–HPLC
竺黄复方片由甘草、力嘎都、牛黄、红花、榜嘎等九味药材组成，具有利肺、消炎、止痛的功效，用于小儿流感引起的肺炎、上呼吸道感染等［1］。该方标准收载于《中华人民共和国卫生部药品标准》藏药第一册，标准未收载鉴别项和含量测定项，不利于生产和使用的相关部门控制其药品质量。本文拟建立甘草酸含量测定方法，增加含量测定项，提高其质量标准。
1 材料
Waters2695/2690分离系统，2996检测器，Empower色谱管理系统，岛津UV-2100型紫外分光光度计，Atuto Science AS5150超声波清洗仪，Sartorius公司BP211D电子天平。甲醇为色谱纯，水为重蒸馏水，其它试剂均为分析纯。
2 方法与结果
甘草酸的含量测定
色谱条件和系统适用性实验用kromasil色谱柱，流动相为甲醇- mol·L-1乙酸铵-冰乙酸，流速1 ml·min-1，柱温：30 ℃，检测波长250 nm［2］，按甘草酸铵峰计，色谱柱理论塔板数不低于2000，甘草酸铵峰与其它峰达到基线分离，峰形对称，色谱图见图1。
溶液的制备对照品溶液的制备：精密称取甘草酸铵对照品适量，置10 ml量瓶中，加甲醇- mol·L-1乙酸铵-冰乙酸溶解并稀释至刻度，摇匀,使成为每毫升中含对照品 mg的溶液即得。
样品溶液的制备：取竺黄复方片适量，研细，取 g，精密称定，置100 ml具塞锥形瓶中，精密加入甲醇- mol·L-1乙酸铵-冰乙酸溶液45 ml，称定重量，超声处理30 min，放冷，称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液，用 μm滤膜滤过即得。
阴性样品溶液的制备：取缺甘草的阴性样品，照上述样品溶液制备方法处理即得阴性样品溶液。
方法学考察
线性范围精密量取上述甘草酸铵对照品溶液2，4，6，8，10 μl注入液相色谱仪，记录色谱图，测定其峰面积，并以峰面积A为纵坐标，进样量C为横坐标，进行回归，得回归方程：A= 673 8C - 67 6，甘草酸铵在～ μg之间，进样量与峰面积线性关系良好。
精密度实验精密吸取对照品溶液10 μl，连续进样5次，甘草酸铵峰面积的RSD为％，表明仪器精密度良好。
重复性实验取竺黄复方片品研细，取 g，5份，精密称定，置100 ml具塞锥形瓶中，精密加入甲醇- mol·L-1乙酸铵-冰乙酸溶液45 ml，称定重量，超声处理30 min，放冷，称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。按上述色谱条件测定，记录色谱图，并计算含量，结果甘草酸含量平均含量为 mg·g-1,RSD为％。上述实验表明，该方法的精密度较好。
稳定性实验取样品供试液与甘草酸铵对照品分别于0，2，4，6，8 h，分别进样10 μl注入色谱仪，记录峰面积，平均峰面积为533 271 ，RSD为 %,说明样品溶液8 h内稳定。
加样回收率实验精密量取甘草酸铵对照品溶液10 ml，5份，分别置100 ml具塞锥形瓶中，水浴上挥干甲醇，取已知含量的样品约 g，5份，精密称定，置上述锥形瓶中，加入甲醇- mol·L-1乙酸铵-冰乙酸溶液45 ml，称定重量，超声处理30 min，放冷，称定重量，用上述溶剂补足减失的重量，摇匀，滤过，取上清液，用 μm过滤膜过滤，作为供试品溶液。按上述色谱条件，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，并计算回收率。结果见表1。表1 加样回收率实验结果
专属性考察精密吸取阴性样品溶液10 μl，注入色谱仪，结果表明干草酸铵位置上无干扰峰。
样品测定样品按项下方法制备样品溶液后，再按上述重复性试验项下方法测定含量。3批样品中甘草酸铵含量分别为，和 mg/片。
3 讨论
在甘草酸的含量测定中，提取溶媒比较了甲醇提取和流动相提取，结果表明用流动相提取效果更佳。
本实验用RP–HPLC法测定竺黄复方片中甘草酸的含量，所建方法简便、准确、重复性好，可用于竺黄复方片的质量控制。
【参考文献】
［1］·藏药，第一册［S］.1995:251.
［2］国家药典委员会．中国药典,Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版社，2005：59.