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一 细胞分离
1 离心分离法
第五节 动物细胞培养的基本方法
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先从生物体取来组织块，将其剪碎，并用消化液将其消化，使组织松散成细胞悬液，然后用缓冲液洗涤、离心、去除残留的消化液而获得所需的细胞。
常用的消化液有胰蛋白酶、乙二胺四乙酸、胰酶－柠檬酸盐、胰酶－EDTA、胶原酶、链霉蛋白酶、木瓜蛋白酶等。
2 消化分离法
细胞计数
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血球计数板计数
自动细胞计数器计数
结晶紫染色细胞核计数法
MTT染色计数法
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细胞传代
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悬浮细胞的传代
加入一倍或几倍的生长液，然后分种两只或多只培养瓶即可。
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消化前需用肉眼或镜下观察需消化的细胞，确认细胞有无污染；
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消化时间不宜过久，一般在室温下静置2～5min,当见细胞层出现麻布样网孔时，即可倒去消化液。
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加入消化液量要适当，以摇动时能盖满单层细胞为度；
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终止消化要先倒去消化液，然后加入有血清的培养基。
2 贴壁细胞的传代
已培养过的瓶子可再次使用，但一般不要超过2～3次。
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2倍体细胞培养时每次传代必须写上传代次数。
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分种数量取决于细胞数和细胞特性，多数细胞分种以20～30万个/ml,每次1传2或1传3。
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传代后一般每天或隔一天换液，每3～5天就要传代一次。
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四 细胞的冻存和复苏
将细胞放入试管内，在冰浴条件下加入预冷的冰冻保护剂（二甲基亚砜+山梨醇+甘油+蔗糖）。密封试管，继续在冰浴中停留15min。然后试管以1℃/min的速度冷却，降到-40℃，在-40℃停留2h后投入液氮罐（-196℃）。
1 细胞的冻存
复温速率
复温速率是指在细胞复苏时温度升高的速度。
一般来说复苏速度越快越好。
常规的做法是，在37℃水浴中，于1～2min内完成复温。
2 细胞的复苏
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第六节 动物细胞大量培养的方法和操作方式
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