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北京全式金生物技术有限企业
背景资料
基因克隆是分子生物学必不可少的工具，老式的T4 DNA Ligase措施试验周期长。
TOPO克隆——5分钟迅速克隆，是克隆技术的革命。这个技术上的飞跃为实现“加速科研”的理念提供了先决条件。
基因定点突变技术——改造基因的便利措施。基因功能研究已经成为生命科学研究的新热点，因此需要强有力的工具保证基因构造和功能关系研究的进行。
TOPO克隆技术
TOPO克隆原理
TOPO克隆方略
TOPO克隆成功的关键
TOPO克隆常见问题及处理措施
TOPO克隆原理
TOPO即Topoisomerase 拓扑异构酶
特点：
由316个氨基酸构成
识别5’-CCCTT-3’
同步具有限制性内切酶和连接酶的功能
不需要能量
TOPO克隆——原理
TOPO克隆——过程
TOPO克隆——过程
TOPO克隆迅速、便捷
载 体
片 段
产 物
5 min
TOPO克隆——克隆方略
有无杂带？有无引物二聚体？
PCR产物
无杂带，有引物二聚体
均有或有杂带
均无
Gel Extraction Kit
PCR Purification Kit
基因克隆、转化
TOPO克隆和老式T4克隆比较
Topo克隆
T4 DNA Ligase克隆
PCR产物
无需纯化可直接用于克隆
（若无杂带和引物二聚体）
需要纯化，否则抑制连接
反应时间
5分钟
过夜（12小时）
操作
载体+片段
（污染几率小）
载体+片段
+T4 DNA Ligase Buffer
+T4 DNA Ligase
（污染几率大）
克隆效率
>85%
～60%
特点
省时（至少节约1天）
快速、高效
费时
TransGen TOPO Vector
pEASY-T1 Cloning Vetor
pEASY-T1 Simple Cloning Vetor
pEASY-T3 Cloning Vetor
pEASY-Blunt Cloning Vetor
pEASY-Blunt Simple Cloning Vetor
pEASY-E1 Expression Vetor
pEASY-E2 Expression Vetor