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了解影响机体免疫应答强度原因;
明确首次应答和再次应答抗体产生规律;
制备牛血清白蛋白(BSA)抗血清;
熟悉佐剂制备和动物免疫惯用方法;
了解抗体检测惯用方法。
免疫血清制备专家讲座
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在免疫学试验中,为制备抗体通常以抗原性物质给动物注射,经一定时间后,动物血清中可产生大量特异性抗体,这种含有特异性抗体血清称免疫血清。
试验原理
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免疫应答影响原因
抗体产生通常与抗原质和量、动物种类以及接种路径有亲密关系。
一、抗原分子结构和性质
:分子量越大,免疫原性越强。
(1)蛋白质
(2)多糖:含有免疫原性, 较蛋白质弱。
(3)核酸:多无免疫原性。
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二、宿主方面原因
同种动物不一样品系及不一样个体对同种抗原产生不一样强度免疫应答。
年纪、性别与健康状态。
三、免疫原剂量及进入路径
(1)剂量
1)剂量不足或过多均不引发免疫应答。
2)重复进入引发强免疫应答。
(2)路径:皮内、皮下、肌肉、静脉、腹腔、呼吸道和口服免疫应答水平依次降低。
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抗体产生普通规律
首次应答和再次应答规律。
抗体产生次序规律:
IgM - IgG - IgA - IgD - IgE
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首次应答和再次应答抗体产生比较
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试验方案
免疫佐剂制备及动物首次免疫(第一周)
再次免疫及血清采集(第二周)
血清采集及抗体检测(第三周)
W1
W2
W3
未免疫血清采集
再次免疫血清采集
首次免疫血清采集
首次免疫
再次免疫
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试验材料
动物:昆明鼠(每组一只),约20g/只。
抗原:4mg/ml牛血清白蛋白(BSA)
佐剂:完全福氏佐剂。
其它:
PBS、1ml塑料管(保留血清用),无菌小试管,棉签,1ml注射器、12#针头等。
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试验流程
12只小鼠
小鼠眼眶取血制备血清
2只
2只
8只
W1
W3
W2
首次免疫(1只/组)
再次 免疫
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