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核酸凝胶电泳终专家讲座
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什么是电泳？
带点颗粒在电场作用下，向着与其电性相反电极移动，称为电泳。生物大分子如蛋白质，核酸，多糖等大多都有阳离子和阴离子基团，称为两性离子在电场中，带电颗粒向正极或负极迁移，迁移方向取决于它们带点符号。
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凝胶电泳有几类？
一·琼脂凝胶电泳（~50kb)
二·聚丙烯酰胺凝胶电泳（分辨范围为1~1000kb）
三·脉冲电场凝胶电泳（分离到高达107bpDNA大分子）
序言；核酸凝胶电泳是分子克隆技术之一，用于分离·判定和纯化DNA或 RNA片段。
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核酸凝胶电泳基本原理
凝胶电泳原理比较简单。当一个带电分子放在电场当中时，它们就会以一定速度移向适当电极。带点分子在电场作用下移动速度，称之为电泳迁移率，它同电场强度和电泳分子本身携带静电荷数成正比。也就是说，电场强度越大，电泳分子所携带静电荷越多，其移动速度也就越快，反之则慢。在哪电泳中，使用无反应活性琼脂糖与聚丙烯酰胺凝胶作支持介质，从而将电泳分子对流运动降低到极低，使电泳分子移动速度与其分子摩擦系数成反比。已知摩擦系数是分子大小、极性及介质黏度函数，所以依据分子大小不一样、构型或形状差异，以及所带净电荷多寡，便能够经过电泳将核酸或蛋白质分子混合物中各种成份彼此分离开来。
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在生理条件下，核酸分子糖-磷酸骨架中磷酸基团，是呈离子状态。从这种意义上讲，DNA和RNA多核苷酸链可称为多聚阴离子。所以，当核酸分子被放置在电场当中时，它们就会向正极方向迁移。因为糖-磷酸骨架在结构上重复性质，相当数量双链DNA几乎含有等量净电荷，所以它们能以一样速度向正极方向迁移。在一定电场强度，DNA分子这种迁移速度，亦即电泳迁移率，取决于核实分子本身大小和 结构。分子质量较小DNA分子比分子质量较大DNA分子，含有较紧密构型，所以其电泳迁移率也就比同等分子质量涣散型开环DNA分子或线性分子要快些。这就是应用凝胶电泳技术分离DNA片段基本原理。
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常见电泳仪
水平电泳仪
垂直电泳仪
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脉冲电泳
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电泳梳子
电泳槽
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电泳仪
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一·琼脂糖凝胶电泳
琼脂糖凝胶电泳是用琼脂或琼脂糖作支持介质一个电泳方法。对于分子量较大样品，如大分子核酸、病毒等，普通可采取孔径较大琼脂糖凝胶进行电泳分离。琼脂糖凝胶含有网络结构，物质分子经过时会受到阻力，大分子物质在涌动时受到阻力大，所以在凝胶电泳中，带电颗粒分离不但取决于净电荷性质和数量，而且还取决于分子大小，这就大大提升了分辨能力。 凝胶分辨能力 同凝胶类型和浓度相关。~50kb；而要分辨较小分子质量DNA片段，则要用聚丙烯酰胺凝胶，其分辨范围为1~1000bp。凝胶浓度高低影响凝胶介质孔隙大小，浓度越高，孔隙越小，其分辨能力也就越强；反之，浓度越低，孔隙就增大，其分辨能力也就越弱。
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