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细菌的生理生化反应
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一、  目标
  了解细菌判定中常见生理生化试验反应原理
  掌握测定细菌生理生化反应技术和方法
细菌的生理生化反应
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二、  原理
各种微生物在代谢类型上表现了很大差异。不一样微生物因含有不一样酶系统，分解利用糖类、脂肪类和蛋白类物质能力不一样，其发酵类型和产物也不相同。细菌生理生化反应在菌株分类判定中有很大作用。
细菌的生理生化反应
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三、  材料
  菌种
大肠杆菌（Escherichia coli）
产气肠杆菌（Enterobacter aerogenes）
普通变形杆菌（Proteus vulgaris）
枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）斜面菌种
  培养基 糖发酵培养基（葡萄糖、乳糖）、葡萄糖蛋白胨水培养基、
蛋白胨水培养基、淀粉培养基、H2S试验培养基、柠檬酸盐培养基
  试剂  V. P试剂、甲基红试剂、吲哚试剂、乙醚、%溴甲酚紫指示剂、碘液。   器具 恒温培养箱、试管、移液管、杜氏小管。
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四、步骤
(一)    糖类发酵试验
（二） 乙酰甲基甲醇试验(V．P试验)
（三） 甲基红试验（）
（四） 吲哚试验
（五） 柠檬酸盐试验
（六） 硫化氢试验
（七） 淀粉水解试验
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(一)    糖类发酵试验
原理 可依据细菌分解利用糖能力差异表现出是否产酸产气作为判定菌种依据。是否产酸，(乳酸、醋酸、丙酸等)可在糖发酵培养基中加入指示剂，经培养后依据指示剂颜色改变来判断。是否产气，(甲烷、氢、二氧化碳等)可在发酵培养基中放入倒置杜氏小管观察。
材料
菌种：大肠杆菌、变形杆菌 培养基：配方：蛋白胨水培养基：蛋白胨 10g NaCl 5g 水 1000mL pH 121℃ 20分钟。葡萄糖发酵培养液：(蛋白胨水培养基 1000mL 酸性复红水溶液※ 2—5mL pH )乳糖发酵培养液试管
另配：20℅糖液(葡萄糖、乳糖、蔗糖) 115℃灭菌—30min
 制法：1、将上述含指示剂蛋白胨水培养基分装于试管中，每管10mL，内加杜氏管 121℃灭菌25min。
2、灭菌后，以无菌操作每管分别加入20℅(1℅浓度)即为不一样糖发酵液配养基。
3、※℅酸性复红水溶液100mL+1N NaOH16mL
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步骤                       1  试管标识                                           取分别装有葡萄糖和乳糖发酵培养液试管各2支，(如设空白取3支)每
种糖发酵试管中均分别标识大肠杆菌、普通变形杆菌。
2  接种培养
以无菌操作分别接种少许菌苔至以上各对应试管中。置37℃恒温箱中
培养，培养24h-48h，观察结果。
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与对照管比较，若接种培养液保持原有颜色，其反应结果为阴性，表明该菌不能利用该种糖，统计用“－”表示；如培养液呈黄色，反应结果为阳性，表明该菌能分解该种糖产酸，统计用“＋”表示。
培养液中杜氏小管内有气泡为阳性反应，表明该菌分解糖能产酸并产气，统计用“＋”表示；如杜氏小管内没有气泡为阴性反应，统计用“－”表示。
结果观察
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（二） 乙酰甲基甲醇试验〔〈伏-普〉(Voges-Proskauer二氏)〕V．P试验〕  原理 一些细菌在葡萄糖蛋白胨水培养液中能分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸缩合，脱羧成乙酰甲基甲醇()，后者在强碱环境下，被空气中氧氧化为二乙酰，二乙酰与蛋白胨中胍基生成红色化合物，（+）反应。  材料 菌 种 : 大肠杆菌（Escherichia coli）、
产气肠杆菌（Enterobacter aerogenes）  培养基：葡萄糖蛋白胨水培养液 配方： 葡萄糖 5g 蛋白胨 5g K2HPO4 2g
H2O 1000 ml PH — 115℃灭菌30min
步 骤 1  标识试管 :取2支装有葡萄糖蛋白胨培养液试管，分别标识大肠杆菌、产气肠杆菌。 2  接种培养 :以无菌操作分别接种少许菌苔至以上对应试管中。置37℃恒温箱中，培养24～48h。
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取出以上试管，振荡2min。；振荡试管，
以使空气中氧溶入，置37℃恒温箱中保温15～30min。
若培养液呈红色，（用“＋”表示）；
若不呈红色，（用“－”表示）。
结果观察
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