基因工程的基本操作程序专业知识.pptx

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基因工程的基本操作程序专业知识
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1、目标基因获取
2、表示载体构建
3、将目标基因导入受体细胞
4、目标基因检测与判定
基因工程基础操作四个步骤
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一、目标基因获取
(一)、目标基因主要是______________________
编码蛋白质结构基因
请举出三个以上例子
（二）、获取目标基因常见方法有哪些?
1、从基因文库中获取
2、利用PCR技术扩增
3、用化学方法人工合成
请阅读P9第一和二两段
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一、目标基因获取
（一）从基因文库中直接获取
：概念见P9
:按外源DNA片段起源分类
种类
基因组DNA文库：含有一个生物全部基因
个别基因文库：只包含了一个生物个别基因，
如：cDNA文库

为了在不知目标基因序列情况下，便于取得所需目标基因。
：
见书本P9
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提取某种生物全部DNA
用适当限制酶切
一定大小DNA片段
将DNA片段与载体连接
导入受体菌中储存
基因组文库

（1）直接分离法(鸟枪法)
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某种生物单链mRNA
单链互补DNA
双链cDNA片段
导入受体菌中储存
与载体连接
cDNA文库
反（逆）转录酶
DNA聚合酶
（2）反转录法：cDNA合成流程图解

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基因组文库和个别基因组文库(cDNA文库)比较
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概念：PCR全称为_______________，是一项
在生物____复制___________核酸合成技术
聚合酶链式反应
体外
特定DNA片段
原理：
DNA复制
2、利用PCR技术扩增目标基因
一段已知目标基因核苷酸序列，方便依据这一序列合成引物
前提：
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过程
高温变性（解旋为单链）
低温退火（引物与单链互补结合）
适温延伸（在Taq酶作用下合成
与模板互补DNA双链）
重复循环
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2、详细过程
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