文档介绍：实验七
玻片凝集试验及抗酸染色
验证性实验
微生物学教研室郭棵棵
实验内容
录像:艾滋病的预防
上次课实验结果观察
操作:1、肠道菌分离鉴定四——玻片凝集试验
2、抗酸染色
材料:1、诊断血清 1ml/6人
2、结核杆菌痰液
3、载玻片
了解:艾滋病的预防方法
结核杆菌的生物学特点
掌握:
——玻片凝集试验的操作与结果观察
2. 抗酸染色的方法和意义
[教学目标]
重点:结核杆菌抗酸染色的操作方法
难点:玻片凝集试验的结果观察
[重点难点]
噬菌体实验结果观察
上次结果观察
DH5a噬菌体
半固体培养基观察细菌有无动力。
蛋白胨水培养基用于观察细菌能否分解色氨酸产生靛基质。
尿素培养基是根据酚红指示剂变色来判断细菌是否分解尿素产碱。
斜面培养基是为本次血清学鉴定实验提供菌种。
半固体、蛋白胨水、尿素、斜面培养结果观察
上次结果观察
半固体培养——动力试验
+
+
-
-
阳性:细菌能运动,有鞭毛。
阴性:细菌不能运动,无鞭毛。
蛋白胨水培养——吲哚试验
尿素酶试验
+
—
操作:蛋白胨水细菌培养物中加入靛基质指示剂,摇匀后静置待液体分层,而后观察指示剂颜色变化进行判断。
分解尿素产氨
(酚红指示剂变红)
操作一
根据前几次实验结果综合判定自己所接种的肠道菌可
能属于哪种肠道病原菌。
血清学鉴定——玻片凝集试验
肠道菌分离鉴定(四)
克氏双糖铁培养基
斜面(代表乳糖)
高层(代表葡萄糖)
H2S
尿素
半固体蛋白胨水
动力靛基质
初步判断
大肠杆菌
伤寒杆菌
副甲
副乙
⊕
-
- ⊕+ - + -
⊕
±
-
+ +
- ± - + -
- ⊕± - + -
痢疾杆菌
- + - - - ±
操作方法
选择相应的血清进行玻片凝集实验:
1、玻片两端分别滴上一滴生理盐水和对应血清,
2、从琼脂斜面挑取少许培养物涂匀,
3、轻轻晃动玻片,血清混悬液中数分钟内出现肉眼
可见的颗粒状或絮状凝集现象为阳性。对照侧
(生理盐水)则均匀浑浊无凝集物出现,为阴性。
凝集反应原理
凝集反应结果判断
结核分枝杆菌
细长微弯杆菌,分枝状排列或聚集成团;
G+,抗酸染色阳性;
专性需氧,营养要求高(L-J培养基);
生长缓慢(18h/代);
菌落呈乳白或淡黄色,菜花状;
液体培养时形成粗糙的皱纹菌膜。
结核分枝杆菌抗酸染色
操作二