文档介绍：克伦特罗酶联免疫检测试剂盒
(产品编号:CB1418)
使用说明书
一、试剂盒简介
本试剂盒适用于组织、饲料及尿样内所含克伦特罗的定量测试。试剂盒性能稳定,操作便捷,灵敏度高。
试剂盒包括以下内容:
中文名称
英文名称
规格
已包被抗体的酶标板(可拆式)
Microtitre Plate
12×8 孔
稀释剂/洗涤缓冲剂(浓缩)(绿帽)
DiLuent/Wash Buffer(Conc.)
1×32 mL
酶标记物抗原稀释剂(蓝帽)
Conjugate Diluent
1×20 mL
酶标记抗原(浓缩)
Conjugate(Conc.)
1瓶
单组分底物/发色剂(棕色瓶)
One Shot Substrate
1×15 mL
标准液(黑色帽)
Standards
6×2 mL
反应终止液(蓝色帽塑料瓶)
Stop Solution
1×15 mL
注:所有浓缩液均需稀释后使用,稀释方法见试剂制备及使用
检测下限
样品
检测下限
尿样
组织
饲料
3ng/g
二、CB1418 克伦特罗试剂盒检测原理
在可拆解成条状的酶标板上,已包被了克伦特罗特异性抗体。
标准液或样品中的克伦特罗会和酶标记物争夺酶标板上抗体的结合位点,形成抗体/抗原复合物或抗体/酶标抗原复合物。
洗涤酶标板,除去游离的酶标记物。加上底物/发色剂。在一定的温度范围内,抗体/酶标抗原复合物催化底物/发色剂发生显色(蓝色)反应。加入酸后,反应终止,同时反应物的颜色由蓝色转为黄色。
颜色的深度与克伦特罗含量成反比。在450纳米(nm)波长的酶标仪上,可读出相应的吸光度值。
三、样品制备
尿液样品制备
尿样不用处理,清亮尿样直接测定(如果尿样有比较严重的浑浊,要过滤或离心直至得到清亮尿样)
(二)组织样品制备(肝、肾、肌肉、视网膜)
所需要的试剂:
50mmol/L 盐酸:一般购买的浓盐酸为10mol/L,所以用蒸馏水按体积比1(浓盐酸):199(蒸馏水)进行稀释即可
500mmol/L磷酸二氢钾缓冲液:,
50mmol/L磷酸二氢钾缓冲液:用500mmol/L磷酸二氢钾缓冲液稀释十倍,
1 mol/L氢氧化钠:
甲醇(100%):一般市场上购买的产品达到分析纯即可
所需要的仪器:
冷冻离心机:要有50mL的离心管和相应的转子
均质器:要求转数在4000转以上
样品前处理步骤:
5g 粉碎的样品与25mL 50mmol/L HCL混合,,以达到均质的目的。
称6g均质物(相当于1g肝脏),加入离心瓶中
离心15分钟/4000g或更高的转速,在10-15 OC(50-59℉)
转移上清液到另一个离心瓶中,加300uL 1 mol/L氢氧化钠混合15分钟.
加入4mL 500mmol/L磷酸二氢钾缓冲液pH ,简单的混合并在4O℃保存至少1. 5小时或过夜
离心15分钟/4000g或更高的转速,在10-15 OC(50-59℉),分离全部上清液(应该是清亮的,非常重要),使其升