文档介绍：第四章 蛋白质化学中的层析技术
层析法也称色谱法(chromatography),是1906年俄国植物学家Michael Tswett发现并命名的。他将植物叶子的色素通过装填有吸附剂的柱子,各种色素以不同的速率流动后形成不同的色带而被分开,由此得名为“色谱法”。
1941年,英国生物学家Martin和Synge首先提出了色谱塔板理论,为后来各种色谱技术的发展奠定了基础。
第一节层析概述
第二节离子交换层析
第三节亲和层析
第四节凝胶过滤
第五节疏水层析
第六节分配层析
第七节吸附层析
第一节层析概述
一、层析的原理
层析技术是一组相关分离方法的总称,当待分离的混合物随流动相通过固定相时,由于各组份的理化性质存在差异,与两相发生相互作用(吸附、溶解、结合等)的能力不同,在两相中的分配(含量对比)不同,而且随流动相向前移动,各组份不断地在两相中进行再分配,从而达到将各组份分离的目的。
二、层析的分类
按固定相基质的形式:
柱层析、纸层析和薄层层析
根据流动相的形式:
液相层析、气相层析
凝胶过滤
原理
吸附层析
疏水层析
分配层析
亲和层析
离子交换
三、层析前蛋白质处理
主要是利用盐析法、等电点沉淀、有机溶剂沉淀等方法,使目的蛋白与其它较大量的杂蛋白分开,这些方法的特点是简便、处理量大、既能除去大量杂质,又能浓缩蛋白质,但分辨率低。