文档介绍：湖州师范学院生命科学学院生物系
实验三小鼠骨髓染色体制片技术
一、实验目的
1、了解动物细胞染色体制片的原理;
2、学****小鼠骨髓细胞染色体的制片方法;
3、观察小鼠细胞染色体的数目和形态。
二、实验原理
※制备染色体标本是细胞遗传学最基本的技术,优良的染色体制片是进行染色体显带、组型分析、原位杂交等的先决条件。
※染色体的制备在原则上可以从所有发生有丝分裂的组织和细胞悬浮液中得到。最常用的途径是从骨髓细胞、血淋巴细胞和组织培养的细胞中制备染色体。
※小型动物的染色体制片最好最有效的材料就是骨髓组织。
※骨髓细胞中,有丝分裂指数相当高,因此可以直接得到中期细胞而不必象淋巴细胞或其它组织那样要经过体外培养。
※对大型动物通常采用对骼骨、脊或胸骨穿刺术吸取红骨髓,小型动物多采用剥离术取股骨以获得骨髓细胞。
二、实验原理
三、实验材料
小白鼠(2n=40)
四、实验仪器设备药品
※离心机、显微镜、恒温水浴锅、天平、剪刀、解剖刀、镊子、注射器及针头、刻度离心管、吸管、载玻片和盖玻片。
※ —%秋水仙素,2%柠檬酸钠溶液, KCl,甲醇,冰醋酸,1/15mol/L磷酸缓冲液(pH=),Giemsa原液
2、取股骨:带手套,拖颈椎法处死
小鼠,剖出股骨。
五、实验步骤
五、实验步骤
2、取股骨:剖出股骨,剔净股骨上的
肌肉。
五、实验步骤
2、取股骨:剖出股骨,剔净股骨上的
肌肉,用2%柠檬酸钠溶液洗净。
五、实验步骤
3、取骨髓细胞:剪去股骨两端,用注射器吸取2%柠檬酸钠溶液1ml,将针头插入骨髓腔,慢慢注射,将骨髓细胞冲入离心管(骨髓细胞液)反复吹洗直至骨腔变白。