文档介绍：真核细胞rna提取的实验报告
实验五真核细胞RNA的提取
实验五真核细胞RNA的提取

本方法利用盐酸胍抑制RNA酶,匀浆裂解细胞,采用有机溶剂抽提去除蛋白质。通过选择性沉淀RNA分子去除DNA。

⑴组织样品处理:取新鲜的组织样品称重后,剪碎成约1cm2的组织块直接加入匀浆液中进行RNA提取,或液氮中速冻-70℃保存。
⑵贴壁培养细胞处理:用PBS洗细胞一次,吸干溶液后将培养板快速移至液氮中冷冻后转到-70℃保存;或加入1ml匀浆至培养板中直接裂解细胞,然后将粘稠的裂解液进一步匀浆。
⑶悬浮培养细胞处理:离心收集细胞,用PHS悬浮漂洗再田心收集,若不立即提取RNA,则可经液氮速冻后转至一70℃贮存备用。
()倍体积盐酸胍匀浆液[至准备好的样品细胞中,高速匀浆1min。
,室温离心10min。
,(),混匀,再加5体积预冷的乙醇,立即充分混匀,-20
℃放置至少2小时。
0℃离心10分钟沉淀核酸,弃上清液,室温干燥。
6,每个提取RNA的组织或细胞样品中,加入l0~15min盐酸胍匀浆液Ⅱ,搅拌溶解。
,立即充分混匀,-20℃至少放置2小时。
0℃离心10分钟沉淀核酸,去上清,室温挥发乙醇。
EDTA() 先加1/2体积EDTA振荡l~2分钟,。.
—正丁醇(4:1)抽提核酸溶液,5000g室温离心l0min,5000g室温离心10min。吸出上清至另一个干净离心管中。
() 混匀,-20℃放置1h以上,此时RNA将选择地沉淀,而DNA仍为溶解状况。
,0℃离心20min,沉于管底的是RNA。
,用4℃预冷的lmol/L乙酸钠()漂洗RNA沉淀。然后20℃ 5000g,离心20分钟。回收RNA。
。按每g组织细胞1m的比例加入RNA溶解液(%SDS,%mol/L EDTA,)。注意: 。
,0
℃放置至少2小时,5000g,4℃离心10分钟,RNA沉淀用70%乙醇漂洗,短暂离心后,弃上清,室温干燥蒸发乙醇。
,加入3倍体积乙醇,
-70℃保存RNA备用。,混匀,12000g,4℃离心回收RNA。

Ⅰ
成分:8mol/L盐酸胍(),(),5mmol/L 2—巯基乙醇,%十二烷基肌氨酸钠
配制方法: 3mol/L乙酸钠() 2—琉基乙醇溶液中,, 10%十二烷基肌氨酸钠,振荡混匀溶解。
Ⅱ
成分:8mol/L盐酸胍(),(),1mmol/L 2
—琉基乙醇,20mmol/L EDTA()
配制方法:取191g盐酸胍, 3mol/I。乙酸钠()
/L 2—巯基乙醇溶液中,再加入10ml EDTA()。加水至250ml混匀。

%乙醇

—正丁醇(4:l,体积比)
,
,

成分:% EDTA,
四、说明
提取RNA时,要特别注意防止RNase的污染,%的二乙基焦碳酸盐(diethyl pyrocarbonate,DEPC)处理。塑料器材均使用一次性用品,并高压灭菌处理,必要时,%DEPC处理。
篇二:真核细胞RNA的提取
真核细胞总RNA的分离提取
发布: 2010-03-10 来自: 易生物实验
RNA是基因表达产物,由以下几