文档介绍：实验十
血液中转氨酶活力的测定(分光光度法)
【实验目的】
【实验原理】
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测定转氨酶活力的方法很多,本实验采用分光光度法。血清中的谷-丙转氨(GPT),在37℃、,可催化基质(底物)液中的丙氨酸与α-***戊二酸生成谷氨酸和***酸:
生成的***酸可与起终止和显色作用的2,4-二硝基苯肼发生加成反应,生成***酸-2,4-二硝基苯腙(黄色),进而在碱性环境中生成红棕色的苯腙硝醌化合物。
尽管基质液中余下的a-***戊二酸同样可生成红棕色苯腙硝醌化合物而影响测定结果,因此在制作标准曲线时,须加入一定量的基质液(内含a-***戊二酸)以抵消由a-***戊二酸产生的消光影响。
其颜色的深浅在一定范围内与***酸的生成量,亦即与GPT活力的高低成正比关系。据此与同样处理的***酸标准液相比较,便可算出或通过标准曲线查出血清中GPT的活力。
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血清
【实验材料和主要仪器、试剂】
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恒温水浴锅、分光光度计、吸管、试管及试管架
:
()
***酸标准溶液
谷丙转氨酶底物
2,4-二硝基苯肼溶液
氢氧化钠溶液
【操作步骤】
管号
试剂/mL
0
1
2
3
4
5
***酸钠
标准液
0

基质液

磷酸缓冲液

***酸含量(umol)

按上表编号及加入试剂。加毕,摇匀,置37℃恒温水浴中保温10min以平衡内外温度。 2,4-二硝基苯肼溶液后再保温20min。 NaOH溶液5mL。室温下静置10min,以零号管作对照,于520nm波长处测定各管光吸收值。以***酸的umol数为横坐标,光吸收值为纵坐标,绘制标准曲线。

取2支试管并标号,用1号试管作为测定管,2好试管作为空白对照管。,置37℃恒温水浴中保温10min以平衡内外温度。,准确保温30min。 2,4-二硝基苯肼溶液,再保温20min.。。 NaOH溶液5mL。室温下静置10min,以2号管作对照,于520nm波长处测定1号管光吸收值。