文档介绍：林薇薇
《卫生化学》实验
中山大学公共卫生学院
高效液相色谱法测定汽水中的苯甲酸
食品添加剂——苯甲酸
食品添加剂是指为改善食品色、香、味以及为防腐和加工工艺的需要而加入到食品中的化学合成物质或天然物质
苯甲酸是我国目前最常用的食品防腐剂,主要作用是防止由微生物活动而引起的食品变质
化学方程式C6H5COOH
溶解性:微溶于水,乙醇,***
酸性:弱酸
俗名: 安息香酸
食品添加剂——苯甲酸
中国(食品添加剂使用卫生标准》(GB2760-1996)
碳酸饮料,最大使用量为 ;
低盐酱菜、酱类、蜜饯,;
葡萄酒、果酒、软糖,;
苯甲酸和苯甲酸钠同时使用时,以苯甲酸计不得超过最大使用量
中国
日本
美国
欧盟
调味糖浆
500mg/kg
500mg/kg
酱油
无酒精饮料
150mg/kg
150mg/kg
HPLC分析模式选择
样品种类
模式
固定相
流动相
Neutrals中性
Weak Acids弱酸
Weak Bases弱碱
Reversed
Phase
反相
C18, C8, C4
cyano, amino
anic
Modifiers
Ionics, Bases, Acids
Ion
Pair
C-18, C-8
anic
Ion-Pair Reagent
Compounds not
soluble in water
Normal
Phase
Silica, Amino,
Cyano, Diol
Organics
Ionics anic Ions
Ion
Exchange
Anion or Cation
Exchange
Resin
Aqueous/Buffer
Counter Ion
High Molecular pounds
Polymers
Size
Exclusion
Polystyrene
Silica
Gel Filtration-
Aqueous
Gel Permeation-
Organic
泵
进样器
检测器
馏分收集器
流动相
HPLC高压输液系统不包括:
A. 贮液器
B. 高压输液泵
C. 六通阀
D. 梯度洗脱装置
六个部分
1. 高压输液系统; 2. 进样系统
3. 分离系统; 4. 检测系统;
5. 数据记录与处理系统; 6. 辅助装置
C8属于正相化学键合固定相,C18属于反相化学键合固定相?
HPLC通过改变流动相的组成和极性,可调整出峰时间并改善分离度?
紫外-可见检测器利用物质吸收受紫外-可见光辐射的性质来进行检测?
实验目的
熟悉HPLC操作条件的选择,以达到化合物的良好分离效果
掌握HPLC测定汽水中苯甲酸的方法
实验原理
样品超声去CO2和乙醇,调pH至中性,过滤后进HPLC进行分析。使用C18柱作为分析柱,甲醇及乙酸铵溶液作为流动相,分离汽水中的苯甲酸。利用紫外检测器在230nm波长处进行检验,以色谱峰的保留时间定性,峰面积定量。
仪器及试剂
高效液相色谱仪(Waters2695)+紫外检测器(Waters2998)
千分之一电子天枰(型号)
高速离心机(型号)
甲醇(优级纯)
(1+1)氨水
1mg/ml苯甲酸标准储备液
Waters 2695
流动相
紫外检测器
柱温箱
可视化面板
Waters2695
自动进样器
运行样品