文档介绍：免疫胶体金技术
Immunogold Technique
一. 概述
(一) 发展历史
1971年 Faulk和Taylon 用兔抗沙门氏菌抗血清与胶体金颗粒结合, 制备成金标抗体, 检测细菌表面抗原的分布
1975年 Horisberger等把胶体金技术推广应用于扫描电镜、透射电镜及冰冻蚀刻电镜的研究
1978年 Geoghegan 发表了胶体金标记物在光镜水平的应用
1981年 Danscher 建立了银显影液增强,光镜
下金颗粒可见性的方法
1983年 Moeremans等在蛋白质转移电泳中应用了免疫金银染色法
1986年 Fritz等在免疫金银法基础上成功进行了彩色免疫金银染色
免疫胶体金技术
以胶体金为标记物应用在免疫组织化学研究中,对细胞表面或细胞内的多糖、糖蛋白、蛋白质、多肽、激素和核酸等生物大分子进行定位研究
(二)胶体金的基本概念
胶体金,一般指金的水溶液,又称金溶胶。
---金以微小的粒子分散在水中所形成的金
溶胶。其中分散的金颗粒直径在1~100nm
之间。
二. 胶体金的制备
(一) 可用多种方法制备胶体金
分散法:包括机械分散法、超声波法、电分散法和胶溶法等
凝聚法:包括物理凝聚法、化学凝聚法(氧化法、水解法和还原法)
其中应用最多的是化学还原法
化学还原法
【基本原理】在氯化金水溶液中加入一定量的还原剂,使金离子还原为金原子。在适当条件下,还原的金原子凝聚成一定大小的金颗粒,形成金溶胶。
【常用还原剂】柠檬酸钠、鞣酸、白磷等
柠檬酸钠还原制备的金颗粒直径较大,15~150nm
白磷还原制备的金颗粒直径较小,3~12nm
【具体制备方法】
(二)影响溶胶稳定性的因素
电解质
胶体金浓度
温度
大分子物质
(三)胶体金的鉴定
【鉴定方法】在电镜下观察金颗粒的大小及金颗粒的均匀程度
【鉴定方法】将胶体金滴在覆有Formvar膜或碳- Formvar膜的镍网上,空气干燥,透射电镜下观察,拍照,测量金颗粒的直径,并计算100个以上胶体金颗粒直径的平均值及标准差
(四)制备胶体金的注意事项
1. 玻璃器皿的清洁
2. 试剂配制
3. 影响胶体金颗粒大小的因素
玻璃器皿清洗→清洁液浸泡24h →流水冲→蒸馏水反复洗涤→晾干
应尽量使用分析纯试剂
各种水溶液必须用三蒸水或去离子水配制
加入还原剂的速度
搅拌是否均匀
制备胶体金所用的烧瓶大小