文档介绍：组方加减三黄汤对鼠感染耐药大肠杆菌的生化指标影响
学生姓名:赵维姿
省畜牧局课题,指导计划(2007-3-3)
一、引言 二、实验材料 三、方法 四、结果与讨论 五、结论
目录
一、引言
大肠杆菌病还可能与其它疾病并发或继发于其它疾病,从而造成临床上用药混乱,极易产生耐药性,造成药残和降低产品品质,给养殖户造成很大经济损失。
中药在临床治疗方面具有独特作用,据报道,中药的活性成分能够明显抑制耐药大肠杆菌的外输系统,对R质粒具有明显的消除作用。
通过对传统中药三黄汤加减配成组方,观察体外抑菌效果,筛选出能够抑制大肠杆菌药物耐药性的抑制剂,来消除其多重耐药。
本实验先通过在体外对人源大肠杆菌进行临床分离细菌鉴定、分离培养、血清型鉴定和耐药性检测,然后再将分离鉴定的菌株回归到动物体内,对鼠的免疫力进行检测,获取有效组方应用于临床,可为该病今后防治提供一定依据。
二、试验材料
试验药品黄连、厚朴、苦参、大青叶、穿心莲、黄芩、黄柏、木香、甘草、黄芪、茯苓。
营养肉汤
麦糠凯琼脂
试验菌株人源2751( O148+O1)、2952(O142+O26+O13)大肠杆菌。
试验动物小鼠
试剂尿素试剂盒、胆固醇试剂盒、总蛋白试剂盒、谷草转氨酶试剂盒、谷丙转氨酶试剂盒、碱性磷酸酶活性检测试剂盒等、免疫球蛋白IgG、IgA、IgM试剂盒.
三、方法
抑制剂配方的制定及提取物的制备
(1)加减三黄汤(MTYS)黄芩12g、黄连12g、穿心莲9g、苦参9g、大青叶15g、厚朴9g、秦皮6g、金银花15g、木香6g、甘草9g、黄芪9g、黄柏12g、茯苓9g。
(2)加减黄芩汤(MSS):黄芩12g、黄连12g、黄柏9g、芍药9g、甘草6g、赤芍15g。
最小抑菌浓度(MIC)的测定采用试管两倍稀释法,细菌接种量约109CFU/ML,同时做阴性、阳性对照。同时将各培养细菌划线接种于相同中药浓度营养琼脂培养基上。
药物敏感性的测定采用打孔法测定中药MTYS对上述菌株的抑菌圈直径
中药抑制剂在机体中使用剂量的确立
耐药大肠杆菌最佳攻毒量的确定
分组与模型制作取小鼠70只,随机分为7组:健康组﹙A组﹚、攻毒2751组﹙B组﹚、攻毒2952组﹙C组﹚、攻毒2751+MSS组﹙D组﹚、攻毒2952+MSS组﹙E组﹚,攻毒2751+MTYSⅠ组﹙F组﹚、攻毒2952+MTYSⅠ组﹙G组)。在攻毒前每组随机抽取2只,做剖检观察和细菌培养。B、C、D、E、F、,。接种后8h出现典型症状时开始给药,,连用7天,试验期为8d,试验第8d逐只进行称重并剖检。
相应测定体重变化及免疫器官指数
血液采集与血清制备
统计结果,确定中药组方疗效
4 结果
组方中药对耐药性大肠杆菌的抑菌作用 、。抑菌直径分别为32mm、30mm为高敏,MTYS无细菌生长。、。抑菌直径分别为31mm、30mm为高敏,MSS无细菌生长,MSS的效果稍好。
中药抑制剂在机体中最佳使用剂量中药MTYS、
。
鼠免疫器官指数的测定结果
表1 鼠免疫器官指数结果
组别
脾指数(g/g)
肝指数(g/g)
阴性对照组﹙A组﹚
±
±
攻毒2751组﹙B组﹚
±
±
攻毒2952组﹙C组﹚
±
±
攻毒2751+MSS组﹙D组﹚
±
± *
攻毒2952+MSS组﹙E组﹚
±
± *
攻毒2751+MTYSⅠ组﹙F组﹚
±
±
攻毒2952+MTYSⅠ组﹙G组﹚
±
±
经2751、2952攻毒后,鼠的脾指数、肝指数变化不明显,经MTYSⅠ和MSS治疗后,MSS组可以显著提高鼠的肝指数,其它不明显。
注:上表中的数据两两进行比较,字母代表组别,与此组比较,小写字母表示差异显著(P﹤);大写字母表示差异极显著(P<)
a阴性组