文档介绍：实验十三系列实验—测淋巴细胞功能 E花环淋转等
实验内容
淋巴细胞分离(第一次)
E花环形成试验(总花环和活性花环,第二次)
淋巴细胞转化试验(形态法,第三次)
淋巴细胞增殖试验(MTT法,第三次)
细胞因子测定(ELISA法,第四次)
淋巴细胞分离实验原理
淋巴细胞成功分离后,便于在体外对机体免疫细胞进行鉴定、计数或功能测定;还可以用于E花环试验、淋巴细胞转化试验及淋巴细胞培养(需无菌操作)。
淋巴细胞的方便来源是外周血,分离的原则是收率较高,纯度较好,失活较低。无论采用哪种方法,应最大可能保持细胞应有活性。
淋巴细胞分离实验原理
分离的技术可根据细胞的物理性状和表面标志设计,根据不同实验目的可采用密度梯度离心法、吸附分离法和其它特殊分离法。
淋巴细胞分离实验原理
本实验采用的是密度梯度离心法。该方法是根据各类血细胞比重的差异(外周血中各种细胞的密度不同,,,淋巴细胞为(±),利用比重介于某两类细胞之间的细胞分离液(等渗的聚蔗糖-泛影葡***,Ficoll)对血液离心,使一定比重的血细胞依相应的密度梯度分布于不同的独立带,从而达到分离的目的。
实验步骤
,加3mlGKN液稀释,手动轻轻摇匀;
,内含2ml Ficoll液的无菌试管2管;
,分别沿管壁缓慢加入,注意保持两种液体界面清晰;
离心20分钟,离心后分为4层。
(PBMC)层(沿管壁周缘吸薄层云雾状)至一新的空离心管内。
,每次以2000rpm离心10分钟,弃上清,沉淀主要为单个核细胞),调整细胞浓度为2×106/ml 。
无菌操作
稀释的血液
分离液
离心
稀释的血液
分离液
稀释的血浆
单个核细胞
分层液
粒细胞、红细胞
E玫瑰花环形成试验原理
人 T淋巴细胞表面的CD2分子即绵羊红细胞受体(ER),在一定的实验条件下,可与绵羊红细胞(SRBC)结合,形成玫瑰花结,称为E玫瑰花环试验(erythrocyte-roseette formation test)。
该试验常用于临床检测人外周血T淋巴细胞的数量和比例,由此可间接反映机体的细胞免疫功能状况。
实验原理
T细胞
SRBC
E受体(CD2)
SRBC受体
总花环实验(Et花环)实验步骤
,细胞浓度为2×106/ml的淋巴细胞,%SRBC悬液,混匀,37℃水浴15min, 500rpm离心5min,取出.
℃冰箱过夜,小心吸去上清,沿管壁加1-%戊二醛,轻轻转动试管,在手心小心混匀。
,待自然干燥后,瑞氏染色,镜下观察。