文档介绍：小鼠同型半胱氨酸(Hcy)检测试剂盒说明书
该试剂盒以 HRP 标记的链霉亲和素复合物(HRP Streptavidin Conjugate,HRP-SA)为基础,可用于检测血液,细胞、组织内的特异性 CD40 抗原。该试剂盒具有灵敏度高、特异性强、定性定位准确、背景清晰。在所用的 CD40 一抗与相应靶抗原结合后,用生物化二抗与一抗特异性结合,最后加入 HRP-SA,形成抗原—特异一抗—生物素化二抗—HRP-SA 复合物,显微镜下观察成像。
小鼠同型半胱氨酸(Hcy)检测试剂盒所含试剂:
试剂 A 通透液:% Triton-X 100 10 mL(选用)
试剂 B 封闭缓冲液(封闭用) 20 mL
试剂 C (原装进口分装)已稀释的即用型 CD40 一抗()
试剂 D (原装进口分装)生物素化羊抗兔 IgG 1 支
(浓度 mg/mL,稀释比为 1:300~1:500)50 μL+抗体稀释液 20ml 试剂 E HRP-SA 复合物 1 支(浓度 1 μM,稀释比 1:50~1:200)100 μL 试剂 F DAB 显色液 5ml
用户自备试剂:
1. 10mM TBS(~)
三羟基氨基甲烷
***化钠
加蒸馏水 800mL,浓盐酸调 pH 值至 ~,最后定容至 1000mL TBS-T:TBS+Tween 20(%体积比)
(依检测抗原不同而选择不同的修复液)
10mM 柠檬酸缓冲液柠檬酸
柠檬酸三钠
加蒸馏水 900mL,浓盐酸调 pH 值至 ,最后定容至 1000mL或: EDTA 修复液() EDTA·2H2O 700mL,用 10mM NaOH 调 pH 值至 ,最后定容至 1000Ml
缓冲甘油封固剂 10 mL
Tween 20 5 mL
石蜡包埋组织切片免疫染色实验步骤(建议方案):
石蜡包埋组织切片 3~4μm : 将待做切片置于切片架上,于 60℃恒温烤箱中至少烤 1 hr;
: 切片放入盛有二甲苯的容器中脱蜡 3 次(即二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ),每次
10 min;
: 切片经下行酒精水化,无水乙醇 5min,95%乙醇 2 次(每次 2min),85%
乙醇 2 min;75%乙醇 2min,自来水冲洗,ddH2O 洗 2×2min;
: 根据抗体说明书推荐方法进行抗原修复,常采用高压、微波(温度达到 98~100℃)或酶消化修复法,室温自然冷却,自来水冲洗,ddH2O 洗 2×
2min,TBS 洗涤(2×2min)(具体修复方法见附 1)* 注:有些抗原勿需修复,直接进入第 5 步封闭。
: 滴加试剂 B,37℃湿盒孵育 30 min;:滴加用试剂 C(即用型一抗),37℃湿盒孵育 2 hr 或 4℃过夜;
: TBS-T 洗涤(3×5 min);
: 滴加试剂 B,37℃湿盒孵育 10 min;
: 滴加用抗体稀释液稀释的生物素化二抗(试剂 D),37℃湿盒中孵育
30 min;
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