文档介绍：COX-2shRNA 对 HSC 甘油三酯、胆固醇、维生素 A 代谢的
影响中文摘要
目的:
研究 COX-2 在活化的肝星状细胞中的表达,探讨 COX-2 与脂代谢关键基因 ACC、HMGCR、CPT1a 在活化的肝星状细胞中作用的相互关系。构建 COX-2 的 shRNA,检测其在大鼠肝星状细胞 HSC-T6 中对 COX-2 基因表达的抑制作用, 以及敲低 COX-2 的表达后,观察 COX-2、ACC、HMGCR、CPT1a 的表达变化, 以及细胞内的甘油三脂、胆固醇、维生素 A 的含量变化,并进一步探讨 COX-2 在肝纤维化的作用机制。
方法:
取肝星状细胞 HSC-T6 为研究对象。实验分为 6 组:第一组为 shRNA 序列 1 组;第二组为 shRNA 序列 2 组;第三组为 shRNA 序列 3 组;第四组为阴性对照组; 第五组尼美舒利药物组;第六组为空载体组。第一组至第第三组为活化的肝星状细胞中加入靶向 COX-2 基因的 shRNA 最佳剂量分别转染 24 小时、48 小时、72 小时。用 RT-PCR 法检测每组肝星状细胞转染后 COX-2、ACC、HMGCR、CPT1a 水平的 mRNA 表达;高效液相色谱法(HPLC)检测每组细胞内甘油三酯、胆固醇、维生素 A 的含量,从而确定靶向 COX-2 基因的 shRNA 沉默 COX-2 基因后对肝星状细胞脂代谢影响的时效关系。实验数据以±s 表示,用 统计软件对数据进行统计分析,以 P﹤ 作为差异显著性标准。
结果:
加入靶向 COX-2 基因的 shRNA 最佳剂量分别转染 24 小时、48 小时、72 小时,结果显示:靶向 COX-2 基因的 shRNA 可有效敲低 COX-2mRNA 的表达,同时呈时间依赖性的减少 HMGCR、CPT1 的 mRNA 表达、增加 ACC 的 mRNA 表达。选择性 COX-2 抑制剂有同样的效果,但是转染组与药物组比较差异无明显统计学意义。 HPLC 结果显示:细胞内甘油三酯含量、维生素 A 呈时间依赖性增加;胆固醇呈时间依赖性减少。
结论:
1、COX-2 可促进 HMGCR、CPT1 的表达,抑制 ACC 的表达。
2、COX-2 的表达被沉默后,可使 HSC 脂滴内的脂肪含量增加,HSC 有可能重新脂肪化。
关键词:肝星状细胞,环氧合酶-2,小发夹干扰 RNA,PCR,高效液相色谱
Effects of shRNA targeting COX-2 on metabolism of triglyceride、cholesterol、vitamin A in hepatic
stellate cells(HSC-T6)
Abstract
Object:
The aim of this study was to investigate the over expression and co-expression of COX-2 and some important genes of lipid metabolism such as ACC、HMGCR、 CPT1a in activated hepatic stellate cell, and to find their relationship to activated
hepatic stellate -2(COX-2)-short interfering RNA is constructed so as to suppress the expression of COX-2 in activated hepatic stellate cell HSC- examined the effect of the down-regulation of COX-2 on expression of
COX-2、ACC、HMGCR、CPT1a and on expression of triglyceride, cholesterol,
vitamin-A, to find out the effects of COX-2 on hepatic fibrosis.
Methods:
Use passage HSC-T6 as study objects. The experiment is divided into 6 groups: The first group is shRNA 1 group; the second group is shRNA 2 group; the third
group is shRNA 3 group;the fort