实验三、四 病原菌的分离和(一)鉴定.ppt

文档介绍：实验三肠道菌的分离培养与鉴定
目的要求:
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基本原理
肠道菌大多为革兰氏阴性小杆菌,采用一般染色和分离培养难以鉴别,故须采用鉴别和生化试验培养方能鉴定。不同种类的肠道菌,产生的酶类和活性不同,在代谢过程中,产生分解产物和合成产物各不相同,利用细菌的生化特性,以生物化学的方法来鉴别细菌称为生化试验。
细菌分离培养和移植应注意下列事项:
。分离培养前应充分考虑所分离的细菌的特性,选择适合其生长的培养基以及所需的气体与培养温度(病原菌一般为37℃)等。
、防止污染。培养基和一切用具必须彻底灭菌;操作时必须靠近火焰,接种环必须经火焰彻底灭菌;操作完毕后,防止再让培养基接触外界空气,接种环通过酒精灯火焰灭菌。
。接种环在烧灼灭菌后,不能立即钓取细菌材料,否则会将细菌烫死;另外,还应注意防止已钓取菌料的接种环,不慎通过火焰而将细菌杀死。
。初代分离时若长出两种以上菌落,应进一步挑选可疑菌落进行纯培养。
一、肠道菌的分离培养法
(一)需氧菌分离培养法
,其原则在于使被检材料充分分散,以便经过培养后得到单个菌落,并可对菌落的形态、颜色、溶血与否等进行观察。
术式
右手似持毛笔的姿势持接种棒的塑料柄处,将接种环伸人酒精灯火焰中烧至通红,再缓慢将接种棒其余金属部分均加以烧灼,准备蘸取材料;左手取琼脂平板,琼脂面与水平面成45°角,接种环同培养基平面也成45°角。靠近酒精灯火焰操作。
方法
接种环经烧灼灭菌、冷却后,蘸取欲分离材料少许,按图实5-2中所示的几种划线方式,选择其中一种进行划线。注意不要划破琼脂,不要划得太疏,不要过多重复划线,以免形成菌苔。划毕,将培养基用皿盖盖好,接种环烧灼灭菌,于皿底用蜡笔标记被分离材料名称及日期,倒转置37℃恒温箱中培养。
(或选择)培养
(一)麦康凯琼脂培养基分离培养
,可抑制大部分革兰氏阳性菌(Gt)的生长,培养基含乳糖,大肠杆菌能分解乳糖,使pH下降(--,红--黄)形成红色菌落,而沙门氏菌和志贺氏菌,不能分解乳糖,菌落小而无色。

将需要鉴别的肠道菌(大肠杆菌和沙门氏菌)或含肠道菌的病料,在康凯琼脂培养基上划线分离,37℃培养24h观察。使之得到单个菌落。
,沙门氏菌形成无色或浅黄色菌落。