文档介绍：高效液相色谱法(HPLC) high performance liquid chromatography 沈阳药科大学药学院 郭兴杰
第一节:概述
一、高效液相色谱法及其特点
(HPLC):以经典液相色谱法为基础,引入气相色谱的理论和实验技术,发展而成的分离分析方法。
、气相色谱法的区别
(1)与经典液相色谱法的比较
高效液相色谱法分离过程
经典液相色谱
固定相:
粒度:60~600μm(多孔)
柱长:10~200cm(d=10~50mm)
n 约为 2~50/m
流动相:靠重力输送
经典液相色谱无在线检测器
差别:
主要在于固定相的性质、形状及粒度,其次是检测手段和输液设备。
缺点:
①粒度范围宽、不规则,不易填充均匀,扩散和传质阻力大。
②无检测设备,分析速度慢、效率低。
只能作为分离手段
高效液相色谱法
固定相:5~20μm,球形。
流动相:高压泵输送液
检测器:在线检测
(2)高效液相色谱与气相色谱比较
气相色谱法分离过程
HPLC与GC的差别:主要在于做为流动相的液体和气体性质之间的差别,其次是操作条件和分析对象的差别。
流动相
惰性气体,与组分分子之间无作用力,只起运载组分的作用。
各种液体,与组分分子之间有作用力,同时与固定相展开对组分的竞争,对分离起很大的作用。
G C :
HPLC:
具有足够挥发性和热稳定性的物质、
气体或沸点较低的化合物。
分析对象广泛,只要求样品制成溶液无
需气化。
GC:
HPLC:
分析对象
操作条件:
温度: GC :一定温度下进行分离。
HPLC:通常室温下进行分离。
检测器:GC :TCD、FID、ECD和NPD
HPLC:UV、DAD、FD、RID
(1)分离效能高(2)选择性高(3)灵敏度高
(4)分析速度快(5)应用范围广
二、高效液相色谱法在药物分析中的应用
色谱法具有分离分析两种功能,因此在药物分析中,HPLC已成为对各类药物及其制剂进行鉴别、检查、杂质分离及含量测定的主要手段。
中国药典:1953~2010年共出版发行八版
滴定分析:各版均占50%以上。
UV:用于含量测定、含量均匀度或溶出度测定。
IR:用于原料药鉴别(2000版444个品种)
85版开始收载HPLC法-7项
90版-76项;2000版200多项;2010版-1000多项