文档介绍：实验4
酶联免疫吸附试验 (ELISA)
实验目的
掌握酶联免疫吸附试验的原理及其用途
熟悉双抗体夹心法和间接法的操作步骤
Principle :
antigen + antibody
Two necessary conditions:
specificity
visibility
Ag-plex
Antibody as research and diagnostic tools
实验原理
免疫标记技术
免疫荧光技术:FITC,PE
免疫酶技术:HRP,AP
ELISA:
Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay
实验原理
用酶标记抗体(或酶标记抗抗体)进行抗原抗体反应,从而将抗原、抗体反应的特异性与酶对底物高效催化作用结合起来,根据酶作用底物后显色,以颜色变化判断实验结果;
可经酶标测定仪作定量分析,灵敏度可达微微克(pg)水平
特异性强,灵敏度高,定性定量检测
常用于标记的酶:
辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)
碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,AP);
它们与抗体结合不影响抗体活性,有一定的稳定性,制成酶标抗体可保存较长时间
实验原理
基本方法:
双抗体夹心法
间接法
竞争法
双抗体夹心法:
已知抗体吸附固相载体,检测未知抗原
此法适用于检验各种蛋白质等大分子抗原,例如HBsAg、HBeAg、AFP等;
只要获得针对受检抗原的特异性抗体,就可用于包被固相载体和制备酶结合物而建立此法。
1st Ab
Ag
2nd Ab
substrates
Colored products
Enzyme
双抗体夹心法:
已知抗体吸附固相载体,检测未知抗原
固相载体上带有的酶量与标本中受检物质的量正相关
间接法:已知抗原吸附固相载体,检测未知抗体
——利用酶标记的抗抗体以检测已与固相结合的受检抗体
——可以用一种酶标抗抗体检测各种与抗原相应的抗体