文档介绍：鱼雌激素(E)酶联免疫分析
试剂盒使用说明书
本试剂盒仅供研究使用。
检测范围:
96T
1ng/L -45ng/L
使用目的:
本试剂盒用于测定鱼血清、血浆及相关液体样本中雌激素(E)含量。
实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中鱼雌激素( E)水平。用纯化的鱼雌激素(E)
抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入雌激素(E),再与 HRP标
记的雌激素(E)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物 TMB
显色。TMB在 HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深
浅和样品中的雌激素(E)呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度(OD 值),通
过标准曲线计算样品中鱼雌激素(E)浓度。
试剂盒组成
1
30倍浓缩洗涤液
20ml×1瓶
6ml×1瓶
12孔×8条
6ml×1瓶
6ml×1瓶
6ml×1/瓶
7
8
9
终止液
6ml×1瓶
×1瓶
×1瓶
1份
2 酶标试剂
标准品(80 ng/L)
标准品稀释液
3 酶标包被板
4 样品稀释液
5 显色剂 A液
6 显色剂 B液
10 说明书
11 封板膜
12 密封袋
2张
1个
标本要求
,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能
马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融
,因 NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
操作步骤
1. 标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀
释。
40 ng/L
20 ng/L
10 ng/L
5 ng/L
5号标准品
4号标准品
3号标准品
2号标准品
1号标准品
150µl的原倍标准品加入 150µl标准品稀释液
150µl的 5号标准品加入 150µl标准品稀释液
150µl的 4号标准品加入 150µl标准品稀释液
150µl的 3号标准品加入 150µl标准品稀释液
150µl的 2号标准品加入 150µl标准品稀释液
ng/L
2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、
待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样 50µl,待测样品孔中先加样品稀释液 40µl,
然后再加待测样品 10µl(样品最终稀释度为 5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽
量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
3.
4.
5.
温育:用封板膜封板后置 37℃温育30分钟。
配液:将 30倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30倍稀释后备用
洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置 30秒后弃去,如此
重复 5次,拍干。
6.
7.
8.
9.
加酶:每孔加入酶标试剂 50µl,空白孔除外。
温育:操作同 3。
洗涤:操作同 5。
显色:每孔先加入显色剂 A50µl,再加入显色剂 B50µl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色
15分钟.
:每孔加终止液 50µl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
:以空白空调零,450nm波长依序