文档介绍：广州市胸科医院检验科
结核菌实验室作业指导书
罗氏药敏操作规程
文件编号: GC-JY-CZ-JH-008
版本:
生效日期:
页码:第1页,共6页
1目的:规范分枝杆菌罗氏药物敏感性(比例法)的操作,使结果更具可信性。
2适用范围:广州市胸科医院检验科临床微生物结核病实验室。
3培养基制备

KH2PO4 柠檬(枸橼)酸镁
MgSO4 7H2O 天门冬素
丙三醇 12ml 蒸馏水 600ml
注:(纯度≥99%),加热溶解,121℃20min灭菌,备用。

孔雀绿染料
无菌蒸馏水 100ml
37℃温箱放置1~2小时助溶。孔雀绿液不能长期保存,如出现沉淀或颜色变浅,都应废弃并制备新鲜溶液。

将新鲜鸡蛋用洗洁精刷洗干净后于75%乙醇中浸泡30min,晾干后使用。以无菌操作方式制备匀化全卵液,并用双层无菌纱布过滤去除不能匀化的膜状物。

在超无菌条件下将下列成分倒入一个大的无菌烧瓶中充分混匀
基础液 600ml
孔雀绿溶液 20ml
匀质全卵液 1000ml
充分混匀后的培养基溶液静置30~60 min,然后分装在无菌螺旋盖培养瓶内,注意拧紧盖子。每支量约10ml以培养基斜面高度占试管的2/3,且底部充满培养基为佳。培养基分装结束后要尽快(15 min内)开始凝固过程,以防沉淀发生。
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结核菌实验室作业指导书
罗氏药敏操作规程
文件编号: GC-JY-CZ-JH-008
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页码:第2页,共6页
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培养基放入凝固器之前,先将凝固器温度升至85℃,培养基放入后待温度达到85℃时开始计算时间,凝固50min后及时将培养基从凝固器中取出或以电动风机将其冷却。凝固好的培养基斜面呈鲜艳的黄绿色,表面光滑无泡,具有一定的韧性和酸碱缓冲能力。
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质量合格的培养基,注明日期后分装于防潮包装内,4℃保存。保存期不能超过4周。培养基保存前应检查瓶盖有无闭封,防止培养基干化和冰箱凝固水的渗水做成污染。

ml基础培养基加入1 ml配制,稀释好的抗结核药液,混匀,无菌分装10 ml/管,85℃凝固50min。

(1)药敏试验用抗结核药物应从厂家取得纯品,并确认纯度和效价,在有效期内使用。(如无法从厂家取得纯品,以临床药品暂代)
(2)异烟肼(INH)、利福平(RFP)、链霉素(SM)、乙***丁醇(EMB)、阿米卡星(AM)、力克菲疾、莫西沙星(MOXI)、左氧***沙星(LOFLX)、克拉霉素(CLA)、丙硫异烟***(TH1321)、利福布汀(RDB)。
、TH1321、RBD用二***甲酰***浴解,再用灭菌蒸馏水稀释外,其他药物可用灭菌蒸馏水溶解、稀释。
,再按比例配成培养基药物浓度。
表1含药培养基药物浓度及加入培养基药物浓度表
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结核菌实验室作业指