文档介绍：一、免疫组化结果的判断原则
⒈必须同时设对照染色。没有对照染色的免疫组化染色结果是不可信的。
⒉抗原表达必须在特定部位。如LCA应定位在细胞膜上;CK应定位在细胞浆内;
PCNA及p53蛋白应定位在细胞核内;EMA应定位在细胞膜上,等等。不在抗原所在部位的阳性着色,一概不能视为阳性。
⒊阴性结果不能视为抗原不表达。由于检测方法灵敏度有高低之分,有时可因染色方法灵敏度不够,而导致阴性反应,判断时应注意。
⒋尽量避开出血、坏死及切片刀痕和界面边缘细胞的阳性表达,特别是酶免疫标记。因为这类阳性着色多系内源干扰,或系人为因素所致。
⒌对免疫组化标记结果的意义不能绝对化,应结合临床资料、X线等影像学及实验结果综合分析。
二、对照染色设计
(一)对照染色的目的
---排除假阴性和假阳性。
假阴性的原因主要有三:
①组织处理不当,抗原丢失过多或被遮蔽
②抗体失活、效价过低或稀释度不合适(主要指一抗,即特异性抗体)
③染色步骤遗漏及差错,或显色剂的选择、缓冲液的pH和离子强度不当等。
假阳性系由多种因素造成的非特异着色所致,原因主要有:
①自发荧光或内源酶等干扰
②抗体试剂不纯(特别是一抗)
③操作失误,如污染、切片干枯或显色剂操作不当等
④Fc受体的干扰,等等
(二)对照的种类及其选用目的
对照染色大致可分为:阳性组织对照、阴性组织对照及阴性试剂对照和自身对照四大类:
⒈阳性组织对照
用已证实含有靶抗原的同源及不同源组织切片或细胞涂片与待检实验切片同时作同样处理和免疫染色的组织对照。正确的结果应呈现阳性
目的:证实所用免疫组化染色流程的有效性,排除假阴性的可能。
⒉阴性组织对照
用已证实不含靶抗原的同步处理和免疫标记染色的组织对照。正确的结果应为阴性
目的:排除假阳性的可能。