文档介绍：实验原理
实验试剂
实验步骤
实验原理
氨基酸分子上的氨基转移到α-***酸分子上的反应称为转氨基作用
. 转氨基作用是氨基酸的重要反应之一,,原
来的氨基酸变成了***酸,原来的***酸变成相应的氨基酸。
纸层析是以滤纸作支持物,用一定的溶剂系统展开,使混合样品
达到分离分析的层析方法。其一般操作是将样品溶解在适当溶剂中,
点样在滤纸的一端;再选用适当的溶剂系统,从点样的一端通过毛细
现象向另一端展开,展开完毕,取出滤纸晾干或烘干,再以适当的显
色剂或紫外灯、荧光灯下观察其图谱。样品经展开后其一物质在纸层
析谱上的位置常用比移值Rf来表示。
Rf =
纸层析可看作是溶质(样品)在固定相与流动相之间的连续抽
提,由于溶质在两相之间的分配系数不同而达到分离。一定的物质在
两相间有固定的分配系数,因而在恒定条件(液剂、PH、温度)
下,各物质有固定的Rf值,据此可达到分析鉴定的目的。
由于滤纸纤维可吸收20~25%的水分;且其中6~7%以氢键形式
与纤维素上羟基结合,一般条件下难脱去;所以纸层析实际上是以水
相作固定相,展开的溶剂作流动相。
纸层析操作按溶剂展开方向可分为上行、下行和径向三种。氨基
酸分离一般用上行法。上行法又分单向(成分较为简单的样品)和双
向(单向时斑点重叠分离不开,于是在其垂直方向用另一种溶剂系统展层)。双相层析谱可分辨十几种以上的样品。
实验试剂
磷酸缓冲液: M
NaH2PO4 溶液19ml混匀,加蒸馏水稀释
20倍。
L-丙氨酸: L-丙氨酸(如DL丙氨酸用量加倍),用
M 磷酸缓冲液溶解,以NaOH溶液
,再用磷酸缓冲液定容到100ml。
L-谷氨酸: g谷氨酸如上法配成100 ml溶液。
L-α-***戊二酸: gα-***戊二酸如上法配成100 ml溶
液。
:用水饱和的苯酚。用新蒸馏的苯酚2份,加蒸馏水1份
(V/V),放入分液漏斗中剧烈摇动后,在暗处静置若干时
间(7-10小时),待分层后,取下层清液备用。贮于棕色
瓶中暗处保存。
%(W/V)茚三***
实验步骤
:称取新鲜猪肝5克在低温下剪碎,用研钵研磨
成糊状备用。
。
管号
试剂
对照管
测定管
(ml)
-***戊二酸(ml)
(ml)
肉糜(g)

对照管当肉糜加入后立即煮沸l0min,而后放人37℃
水浴中与测定管同时保温,测定管加入肌肉糜后放人37℃
水浴中保温lh,然后于沸水浴中加热10min终