mir26b影响脂肪细胞胰岛素敏感性的机制分析.docx

文档介绍：5. miR-26b 过表达对人脂肪细胞 PI3K 信号通路的影响 25
6. miR-26b 靶基因预测和验证 26
讨论................................................................................................................................27
结论................................................................................................................................31
参考文献...................................................................................................................... 32
致谢............................................................................................................................. 34
附录............................................................................................................................. 36
A. 英文词汇对照 36
B. 主要试剂配制方法 37
C. 个人简历 39
D. 已发表文章 40
E. 综述 41
miR-26b 影响脂肪细胞胰岛素敏感性的
机制分析
中文摘要
目的:阐明 miR-26b 过表达对脂肪细胞胰岛素敏感性调控的分子机制。方法:
1. 高脂饮食喂养 SD 大鼠,建立饮食诱导肥胖(Diet-induced obesity, DIO) 大鼠模型。高糖、高胰岛素环境下诱导建立 3T3-L1/HPA-v 胰岛素抵抗脂肪细胞模型;
2. 采用 Real time PCR 技术,检测动物及细胞模型中 miR-26b 的表达;
3. 胰岛素(Insulin)、3-异丁基-1-***黄嘌呤(3-isobutyl-1-methyxanthine, MIX)、地塞米松(Dexamethasone, Dex)混合诱导剂诱导 3T3-L1 前体脂肪细胞分化为成熟脂肪细胞。胰岛素、3-异丁基-1-***黄嘌呤、地塞米松和罗格列***
(rosiglitazone)混合诱导剂诱导 HPA-v 前体脂肪细胞分化为成熟脂肪细胞;
4. 构建 miR-26b 过表达慢病毒表达载体,感染人成熟脂肪细胞;48h 后在荧光显微镜下,判断病毒感染的效率;
5. 采用同位素标记葡萄糖进行糖摄取实验,检测胰岛素刺激下脂肪细胞对葡萄糖摄取量的变化;
6. Western Blot 技术, 检测 PI3K 信号通路中关键蛋白分子胰岛素受体
(insulin recepor, IR)、胰岛素受体底物(insulin receptor substrate, IRS)、AKT、 p-AKT、葡萄糖转运体-4(Glucose transporter type 4, GLUT4)的表达及 GLUT4 膜蛋白(mGLUT4)的含量;
7. 生物信息学预测 miR-26b 的靶标,采用荧光素酶报告实验进行靶标验证。结果:
1. 高脂饮食诱导后 SD 大鼠出现肥胖及代谢紊乱的特征,成功构建 DIO 大鼠模型。DIO 大鼠肠系膜脂肪组织中 miR-26b 的表达水平下降,且与应用稳态模
型评估的胰岛素抵抗指数( Homeostasis model assessment of insulin resistance,
HOMA-IR)呈显著负相关;
2. 胰岛素抵抗细胞模型中 miR-26b 的表达水平显著降低;
3. miR-26b 过表达促进脂肪细胞胰岛素刺激下的葡萄糖摄取;
4. miR-26b 过表达可以显著上调脂肪细胞胰岛素刺激下的 mGLUT4 含量;
5. miR-26b 过表达可以显著提高磷脂酰肌醇激酶 3 ( phosphatidylinositol 3-kinase, PI3K)胰岛素信号通路中 p-AKT 水平;
6. 荧光素酶实验的结果表明,第 10 号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因( phosphatase and tensin homolog deleted on chrom