β-半乳糖苷酶的诱导合成.ppt

文档介绍：实验一 β-半乳糖苷酶的诱导合成
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大肠杆菌细胞在培养过程中,添加诱导剂(乳糖或其他半乳糖),能迅速诱导β-半乳糖苷酶的合成。该酶的诱导合成受葡萄糖的阻遏,称为分解代谢物阻遏,
而环腺苷酶(cAMP)可使分解代谢物阻遏作用解除。
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试剂和材料
1)大肠杆菌菌株。
2)营养肉汤培养基:蛋白胨5%,牛肉膏3%,NaCl 5%,pH7。
3)。
4)。
5)cAMP钠盐溶液:。
6)甲苯。
7)邻-硝基酚-β-D半乳糖苷(ONPG)溶液:称取40 mg ONPG,溶解于100 ml,pH ,。
8),。
9)水浴恒温振荡器。
10)恒温水浴槽。
11)分光光度计。
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操作方法
%培养过夜的大肠杆菌种子液接种于40ml营养肉汤培养基中,于37℃振荡培养。
(约40min),分装到4根L-试管中,。
(记得标上编号)
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2)4根L-试管分别添加:
①
(建议标编号:A 1,2,3,4)
② ml乳糖溶液和1 ml 无菌水;
③ ml乳糖溶液, ml葡萄糖溶液和
ml无菌水;
④-Na溶液各 。
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3)将4根L-试管同时于37℃振荡培养,每隔20 min,分别取出2 ml培养液于小试管中,各加一滴甲苯,于37℃振荡30 min置冰箱以备酶活力测定。
(记得标上编号)
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- 半乳糖苷酶的活力测定:
取上述甲苯处理的细胞悬浮液,,分别加入3 ml ONPG溶液作为底物,于30℃反应10 min分别测定反应前后的OD420

(若OD>,则需稀释)
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在420 nm波长下,,即:
酶活力(单位)=△OD420×1000
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